[发明专利]一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标丙吡胺、用于检测丙吡胺抗体-酶标丙吡胺复合物的指示试剂。

2.根据权利要求1所述的丙吡胺的免疫检测试剂，其特征在于：所述酶标丙吡胺由丙吡胺和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

3.根据权利要求1所述的丙吡胺免疫检测试剂，其特征在于：所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

4.一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶(GDH)与丙吡胺偶联，纯化偶联的酶标抗原。

(2)丙吡胺均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由丙吡胺抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

5.根据权利要求4所述的一种丙吡胺免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)具体过程为：

1)葡萄糖脱氢酶(GDH)与丙吡胺的偶联

a.将5-30mg丙吡胺溶于100-500μL二甲基甲酰胺(DMF)中，轻微振荡溶解；同时，取10-50mg规格为100-300KU的GDH溶解于PBS缓冲液中震荡、均匀溶解。

b.将丙吡胺溶液在搅拌下缓慢加入GDH溶液中，同时缓慢滴入10-50μL戊二醛溶液，滴加完毕后将溶液置于4℃搅拌反应过夜。

2)纯化偶联的酶标抗原

通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物，于2-8℃下储存。

6.根据权利要求4所述的一种丙吡胺免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体过程如下：

试剂1的制备：将2-5g氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、0.5-3g葡萄糖用0.5-2L磷酸盐缓冲液溶解制成均相酶底物；将丙吡胺抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000；

试剂2的制备：将制备的葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物加到磷酸盐缓冲液中，上述偶联物与磷酸盐缓冲液的体积比为1:100～1:10000。

7.利用权利要求1至4任意一项所述的丙吡胺免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将待测样本与丙吡胺抗体接触；

2)根据待测样本中丙吡胺与丙吡胺抗体的结合情况，利用指示试剂判断样本中丙吡胺的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液。