[发明专利]一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标丙吡胺、用于检测丙吡胺抗体‑酶标丙吡胺复合物的指示试剂；上述酶标丙吡胺由丙吡胺和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的丙吡胺免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中丙吡胺含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

丙吡胺（disopyramide，DP）又称双异丙吡胺、吡二丙胺、达舒平，是一种应用多年的Ia类抗心律失常药物，其电生理、血流动力学和抗心律失常作用与奎尼丁相似，具有直接膜稳定作用和间接抗胆碱作用，主要用于治疗心室和心房心律不齐，具有作用比奎尼丁强、无β受体阻断作用、对血压影响小等特点。

并且，DP对药物蛋白的结合作用的研究有着重要的临床价值。丙吡胺主要不良反应是由较强的抗胆碱作用所引起，有口干、便秘、尿潴留、视觉障碍及中枢神经兴奋等，久用可引起急性心功能不全，宜慎用。所以在有关食品等样品中对丙吡胺进行快速、灵敏的测定很有必要。

目前检测丙吡胺的常用方法有：高效液相色谱分析、分光光度法和毛细管电泳法等。其中，高效液相色谱分析费时且不易自动化，并且使用紫外检测时需要衍生；分光光度法检测结果准确度相对不高；毛细管电泳法灵敏度较低并且重现性较差。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中丙吡胺检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中丙吡胺含量的丙吡胺均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标丙吡胺、用于检测丙吡胺抗体-酶标丙吡胺复合物的指示试剂；上述酶标丙吡胺由丙吡胺和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种丙吡胺免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与丙吡胺偶联，纯化偶联的酶标抗原。

（2）丙吡胺均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由丙吡胺抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种丙吡胺免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与丙吡胺的偶联

a. 将5-30 mg丙吡胺溶于100-500 μL二甲基甲酰胺（DMF）中，轻微振荡溶解；同时，取10-50 mg规格为100-300 KU的GDH溶解于PBS缓冲液中震荡、均匀溶解。

b. 将丙吡胺溶液在搅拌下缓慢加入GDH溶液中，同时缓慢滴入10-50 μL戊二醛溶液，滴加完毕后将溶液置于4℃搅拌反应过夜。

2）纯化偶联的酶标抗原

通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-丙吡胺偶联物，于2-8℃下储存。