[发明专利]一种用于检测上火的血清特异性miRNA的试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201810490199.9 | 申请日： | 2018-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN108424961B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 包洁;范永升;窦晓兵;张喜召 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 黄欢娣;邱启旺 |
| 地址： | 310053 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 上火 血清 特异性 mirna 试剂盒 及其 应用 | ||
1.联合检测血清miR-122-5p、miR-483-5p、miR-3197和U6的试剂在制备中医上火miRNA实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用，其中U6作为内参。
2.如权利要求1所述的应用，其检测体系包括反转录反应体系和qPCR反应体系，其特征在于：所述反转录反应体系中包括miR-122-5p、miR-483-5p、miR-3197和U6的反转录引物；所述qPCR反应体系中包括针对miR-122-5p、miR-483-5p、miR-3197和U6的扩增引物序列；针对所述miR-122-5p的反转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；针对所述miR-483-5p的反转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；针对所述miR-3197的反转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；针对所述U6的反转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；针对所述miR-122-5p的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.9所示；针对所述miR-483-5p的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.10所示；针对所述miR-3197的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.11所示；针对所述U6的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8和SEQ ID No.12所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：用于配制所述反转录反应体系的试剂包括脱氧核糖核苷三磷酸、反转录缓冲液、RNA酶抑制剂、反转录酶和反转录引物液；用于配制所述qRCR反应体系的试剂包括SYBR Green混合液、扩增引物液和纯水。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述脱氧核糖核苷三磷酸的体积是0.5μl，所述反转录缓冲液的体积是2.0μl，所述RNA酶抑制剂的体积是0.5μl，所述反转录酶的体积是1.0μl；所述RNA酶抑制剂的使用浓度为40U/μl，所述反转录酶的使用浓度为200U/μl。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述SYBR Green混合液的体积是10μl，所述扩增引物液的体积是0.8μl，所述扩增引物液的使用浓度为10μM。
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