[发明专利]一种用于检测上火的血清特异性miRNA的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及miR‑122‑5p、miR‑483‑5p和miR‑3197联合使用作为中医上火分子标记物的应用；涉及miR‑122‑5p、miR‑483‑5p、miR‑3197和U6联合使用在制备中医上火miRNA检测试剂盒中的应用；本发明采用血清hsa‑miR‑122‑5p、hsa‑miR‑483‑5p和hsa‑miR‑3197作为诊断标志物，经大样本验证，在实热上火人群中，单个血清hsa‑miR‑122‑5p、hsa‑miR‑483‑5p或hsa‑miR‑3197均显著性低表达，本发明提供的用于检测实热上火体质的试剂盒，通过对血清hsa‑miR‑122‑5p、hsa‑miR‑483‑5p和hsa‑miR‑3197的同时相对定量，鉴别实热上火体质，诊断的敏感度为90.9％，特异度为72.7％，具有较高的准确性，并且高于单个miRNA的诊断特性。可以代替传统望、闻、问、切的中医诊断方法，将中医证候的诊断与现代分子生物学相结合，达到诊断的标准化。

技术领域

本发明设计一种miRNA的检测产品以及miR-122-5p、miR-483-5p和 miR-3197作为上火的分子标志物的应用，属于生物技术领域。

背景技术

根据《中华中医药学会团体标准》-上火的诊断和治疗指南的记载，中医上火是指因精神紧张、过度劳累、辛热药食、气候变化等因素，引起的人体以头面部口、舌、牙龈、咽喉、眼、鼻等部位皮肤黏膜出现红肿热痛、溃疡为主，并可伴有全身症状的一种轻微且易反复的疾病。通常表现为口腔溃疡、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤、咽痛、口干、牙衄、鼻衄等头面部粘膜症状，同时伴有舌红、脉数等表现的病症。随着饮食结构的变化和工作压力的增强，上火现象在现代生活中的发生率不断上升。但其诊断缺少明确的理化手段和依据。

研究发现微小RNA(microRNA，miRNA)与上火的发生密切相关。miRNA 是一类高度保守，长度约在19-24个核苷酸的内源性非编码小分子单链RNA，能通过与靶基因mRNA特异性的碱基互补配对，引起靶基因mRNA的降解或者抑制其翻译，从而参与调控细胞增殖、分化及凋亡过程。血清中的miRNA可稳定存在并可作为血清标志物。

血清miRNA的检测可作为中医上火有前景的诊断和预测指标，但上火相关的特异性miRNA表达谱的筛选、检测方法及检测程序的标准化、稳定内参基因的选择都是迫切需要解决的问题。血清中的miRNA含量远低于组织，需要一种非常灵敏且特异的检测方法；又由于miRNA引物序列短，引物设计比较困难，没有针对性的软件可以直接利用，故引物及体系均需筛选及优化过程。目前对 miRNA的高通量筛查一般采用芯片技术，成本高、特异性和灵敏度有限，且不能满足零散标本实时检测需求；对少数miRNA的实时检测多采用Taqman探针法，部分已形成商业化试剂盒产品，但成本和售价高昂。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测快速方便、准确率高，可以实现中医上火早期的辅助诊断的miRNA检测试剂盒，以及提供miR-122-5p、miR-483-5p和 miR-3197联合使用作为中医上火分子标记物的应用。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：miR-122-5p、miR-483-5p、miR-3197和U6联合使用在制备中医上火miRNA检测试剂盒中的应用，其中U6作为内参。