[发明专利]一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法

权利要求书

1.一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于包括以下方法步骤：

（1）制备FAOD/PB-DSPE电极，包括以下步骤：

（a）采用丝网印刷依次将碳黑、银墨、 Ag/AgCl墨和绝缘油墨在基板上印刷，每次印刷后进行烘箱干燥，得DSPE电极；

（b）将步骤（a）所得DSPE电极与恒电位仪连接，DSPE电极置于K₃[Fe(CN)₆]、FeCl₃、KCl和HCl的混合溶液中，开启恒电位仪沉积，再在-0.5 V~1 V的变化电位范围以50 mV/s的扫描速度循环扫描，即得PB-DSPE电极；

（c）将步骤（b）所得PB-DSPE电极室温干燥后，在其表面滴加FAOD的Tris-HCl水溶液进行修饰，干燥得FAOD/PB-DSPE电极；

（2）配制标准溶液：配制HbA1c和GSP的标准磷酸盐缓冲水溶液，其浓度均分别为0.1mmol/L，0.5 mmol/L，1.0 mmol/L，1.5 mmol/L和2.0 mmol/L；

（3）制作标准曲线：以步骤（1）制得FAOD/PB-DSPE电极与恒电位仪连接，在同一恒定检测条件下，检测步骤（2）配制的不同浓度的HbA1c和GSP的标准溶液的响应电流，以检测的响应电流为Y值，溶液的浓度为X值，分别绘制HbA1c和GSP的标准曲线，计算HbA1c和GSP的回归方程；

（4）准备待测溶液：取血液样本用生理盐水稀释、离心分离，分离出血清和红细胞；移取血清和红细胞分别加入到不同的含有蛋白酶的试管中，充分震荡，得血清试样和红细胞试样；

（5）测定血液中HbA1c和GSP的含量：将2个步骤（1）制FAOD/PB-DSPE电极与恒电位仪连接，形成双通道电极检测通道，在与步骤（3）相同的检测条件下，同时将步骤（4）中的血清试样和红细胞试样进样至双通道电极检测通道中，检测血清试样中GSP和红细胞试样中HbA1c的响应电流Y，分别代入回归方程，计算得到的两个X值分别为血清试样中GSP的浓度、红细胞试样中HbA1c的浓度，从而得出血液样本中的HbA1c和GSP的含量。

2.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于制备FAOD/PB-DSPE电极的步骤（b）中K₃[Fe(CN)₆]、FeCl₃、KCl和 HCl的浓度分别为1.8-2.2 mmol/L、1.8-2.2 mmol/L、0.08-0.12mol/L和8-12mmol/L，K₃[Fe(CN)₆]且FeCl₃的浓度相同。

3.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于步骤（b）中扫描圈数为10-15圈。

4.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于步骤（b）中沉积电位为0.3-0.5V，沉积时间为280-320s。

5.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于FAOD的Tris-HCl水溶液的滴加量为覆盖整个电极的工作面。

6.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于所述步骤（3）中检测条件为：电压为-0.5~0.4V，以50~150 mV/s的速度扫描，反应时间为4~6min。

7.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于所述步骤（4）中，生理盐水的体积是血液样本的体积的50倍。

8.根据权利要求1所述的一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，其特征在于所述步骤（4）中，血清试样和红细胞试样中蛋白酶的浓度均为0.2mg/mL。