[发明专利]一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法，该方法包括以下步骤：1)制备FAOD/PB‑DSPE电极；2)配制HbA1c和GSP的标准溶液；3)制作HbA1c和GSP的标准曲线；4)准备待测溶液；5)将两个FAOD/PB‑DSPE电极与恒电位仪连接，形成双通道电极检测通道，采用循环伏安法同时测定待测溶液中的HbA1c和GSP的含量测定血液。本发明的方法所用检测试剂成本低、检测过程不会污染检测仪器、操作方法便捷性好、方法灵敏性高，可广泛应用于测定血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的含量。

技术领域

本发明涉及一种同时快速检测血液中糖化血红蛋白和糖化血清蛋白的方法。

背景技术

糖尿病是一种由胰岛素分泌缺陷所引起的慢性代谢疾病。长期的高血糖会带来各种各样的风险，例如会造成不同器官和组织的并发症，包括心脏、大脑、血管、眼睛和神经末梢等。人们大多通过测量血糖来判断糖尿病，然而血糖水平受多种因素的影响，例如天气、食物等，需要经常检测，十分麻烦。

糖化血红蛋白(Glycosylated hemoglobin，HbA1c)是一种稳定的糖化产物，它通过血红蛋白和碳水化合物之间的非酶不可逆反应形成。HbA1c浓度与血糖浓度成比例，但是因为糖基化不会改变血红蛋白的氨基酸序列，所以它的值不会受到运动或者食物摄取的影响，能够在120天内保持几乎不变。因此，HbA1c的值可以反映糖尿病患者长期的血糖水平。然而，单独检测HbA1c会导致把糖尿病病程短于3个月的患者遗漏掉。

糖化血清蛋白(Glycosylated serum protein，GSP)是葡萄糖和血清白蛋白或蛋白质分子N末端酶法产生的糖化产物。血清白蛋白的半衰期约为21天，并且不受血糖浓度的影响。因此，GSP可以反映1-2周的平均血糖水平。同时，GSP还可显示2-3周内的血糖控制水平。因此，GSP检测是HbA1c检测的有效补充。同时检测HbA1c和GSP可以有效地筛查和监测糖尿病，这将会在未来的应用中产生巨大潜力。

目前在临床和实验室检测中，已经有许多方法能够确定HbA1c浓度，包括国际临床化学和实验医学联合会推荐的高效液相色谱串联电喷雾质谱法或者高效液相色谱串联毛细管电泳法。这些方法根据其原则可以分为两类。其中一类是基于糖基化和非糖基化血红蛋白的电荷不同，例如离子交换色谱法和电泳法。另一类方法，例如免疫法，亲和层析法和酶法等，都是基于糖化血红蛋白的结构不同。近年来，HbA1c的及时检测方法也在不断发展，目前主要依赖于纸层析色谱法。同时，一些能够快速检测HbA1c的仪器也在不断开发，与实验室检测方法相比，及时检测法拥有一些优势，比如操作方便、前处理时间短等，这些都有助于帮助患者及时确定糖尿病的进展情况。

对于GSP浓度的测量，过去人们大多依赖于硝基四氮唑蓝比色法(nitrobluetetrazalium，NBT)和葡萄糖苯脎分光光度法(glucose phenylosazone，GPS)。其中，NBT方法灵敏度高，抗干扰能力强，但是因为污染物容易被吸附在自动生化分析仪的管道上，所以该方法容易引起污染。GPS方法具有较好的特异性，不污染分析仪，但该技术需要昂贵的检测试剂，在临床应用中比较难以实现。现如今通过使用酶和特异性的染色单体反应，也有人提出了定性或定量的GSP检测方法。这些方法非常准确，但仅限于实验室实验，不能快速简单地提供实时分析结果。现如今及时的GSP检测方法尚未开发，因此，我们需要研究能够实现低成本，并且拥有高灵敏度和良好的准确性的方法。

果糖缬氨酸(Fructose valine，FV)是HbA1c或GSP蛋白水解消化后都会产生的氮末端水解产物。通过测定FV浓度，可以检测血液中HbA1c和GSP浓度。而FV可以被果糖氨基酸氧化酶(Fructosyl amino acid oxidase，FAOD)氧化，产生H₂O₂。因此，HbA1c和GSP浓度可以通过检测H₂O₂浓度间接测量。