[发明专利]一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组，其特征在于，包括用于扩增人参18s rDNA的第一引物对，所述第一引物对扩增的基因片段长度为100bp～200bp；

所述第一引物对识别至少一个SNP分子标记，所述SNP分子标记位于所述人参18s rDNA与人参属非人参物种18s rDNA的区别碱基。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述人参18s rDNA的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，所述SNP分子标记包括SNP分子标记I和SNP分子标记II；

所述SNP分子标记I位于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第497位碱基，所述SNP分子标记I的多态性为G/C；

所述SNP分子标记II位于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第501位碱基，所述SNP分子标记II的多态性为C/G。

3.根据权利要求1或2所述的引物组，其特征在于，所述第一引物对包括：

I-RS-166F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

I-RS-166R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述的引物组，其特征在于，还包括用于扩增所述人参属非人参18s rDNA的第二引物对，所述第二引物对扩增的基因片段长度为100bp～200bp，所述第二引物对识别至少一个所述SNP分子标记。

5.根据权利要求4所述的引物组，其特征在于，所述第二引物对包括：

II-RS-166F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

II-RS-166R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.一种人参配方颗粒的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，提取待测中药配方颗粒的基因组DNA；

S2，以所述基因组DNA为模板，采用权利要求1-3任一项所述的引物组进行PCR扩增；

S3，根据第一引物对扩增的PCR产物判断所述待测中药配方颗粒中是否含有人参配方颗粒。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，所述S3步骤包括：

若所述第一引物对扩增的PCR产物中含有长度为100bp～200bp的基因片段，则所述待测中药配方颗粒中含有人参配方颗粒。

8.根据权利要求6或7所述的鉴定方法，其特征在于，若所述待测中药配方颗粒中含有人参配方颗粒，还包括S4步骤：

以所述基因组DNA为模板，采用权利要求4或5所述的引物组中的第二引物对进行PCR扩增；

根据第二引物对扩增的PCR产物判断所述人参配方颗粒中是否含有非人参掺杂品；

若所述第二引物对扩增的PCR产物中含有长度为100bp～200bp的基因片段，则所述人参配方颗粒中含有非人参掺杂品。

9.根据权利要求6-8任一项所述的鉴定方法，其特征在于，

所述步骤S3中PCR扩增的反应程序为：

95℃预变性5min；

95℃变性20s，56-61℃退火20s，72℃延伸20s，40个循环；

72℃延伸5min；

所述步骤S3中PCR扩增的反应体系为：

基因组DNA，≥10ng/μl，2μl；

I-RS-166F，10μM，0.4μl；

I-RS-166R，10μM，0.4μl；

2×MightyAmp DNA Polymerase Mix，10μl；

MightyAmp DNA Polymerase，1U/μl，0.5μL；

双蒸无菌水，7.2μl。

10.一种用于鉴定人参配方颗粒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-5任一项所述的引物组，和/或PCR扩增的反应体系；

所述PCR扩增的反应体系为：

基因组DNA，≥10ng/μl，2μl；

I-RS-166F，10μM，0.4μl；

I-RS-166R，10μM，0.4μl；

2×MightyAmp DNA Polymerase Mix，10μl；

MightyAmp DNA Polymerase，1U/μl，0.5μL；

双蒸无菌水，7.2μl。