[发明专利]一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法

说明书

本发明公开了用于鉴定人参配方颗粒的引物组，包括用于扩增人参18srDNA的第一引物对，第一引物对扩增的基因片段长度为100～200bp；第一引物对识别至少一个SNP分子标记，SNP分子标记位于人参18s rDNA与人参属非人参物种18s rDNA的区别碱基。本发明提供的第一引物对能够特异性识别并扩增人参配方颗粒基因组中的18s rDNA，检测人参配方颗粒中是否含有人参基原。本发明公开了人参配方颗粒的鉴定方法，利用上述的引物组进行等位基因PCR扩增，根据PCR扩增结果实现对人参配方颗粒真伪的鉴定，上述鉴定方法具有高准确性和高稳定性，为人参配方颗粒溯源提供依据，有利于统一配方颗粒的质量管理标准。

技术领域

本发明属于分子鉴定技术领域，具体涉及一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法。

背景技术

中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥和制粒等工艺过程精制而成，在中医临床配方后供患者冲服使用。其具有剂量小，服用、携带、贮藏、运输方便等特点，弥补了传统饮片上述方面的不足，是对传统中药饮片的补充。然而，中药配方颗粒已经失去原有重要饮片的形态学、粉末显微学鉴别特征，其鉴别与监管已成为制约配方颗粒产业的瓶颈问题之一。2015年12月国家食品药品监督管理总局发布了关于征求《中药配方颗粒管理办法(征求意见稿)》意见的公告(2015年第283号)，其中规定“应准确鉴定其物种，包括亚种、变种或品种，不同种的中药材不可相互混用”，为中药配方颗粒的质量控制问题提出了新挑战。确定一种准确、稳定的中药配方颗粒中原料物种的鉴定方法，为配方颗粒中原料药材的溯源提供依据，对于建立统一的中药配方颗粒质量标准，规范中药配方颗粒的市场监管和临床应用具有重要意义。

人参是我国常用的滋补类名贵中药材，为常用的40种大宗药材之一，具有较高的临床药用价值。人参配方颗粒(ginseng formula granule)以人参饮片为原料，经工业化加工、萃取、浓缩、干燥和制粒形成。人参配方颗粒是临床最为常用的配方颗粒之一，年需求量巨大。受经济利益驱动，市场上时有以西洋参和三七等化学成分相似的人参属植物饮片掺杂、替代人参饮片的现象发生，对人参配方颗粒的产品质量和药用安全带来损害。由于人参配方颗粒失去了人参饮片的形态学特征和显微学特征，因此，中药材的性状鉴定和显微鉴定等传统鉴定方法无法实现对人参配方颗粒原料药材真伪及混伪的鉴定。

DNA分子鉴定由于其高特定性、稳定性和准确性，成为对传统鉴定方法的有效补充，在很多动植物鉴定中得到了成功应用。例如，现有技术中公开了利用DNA分子鉴定的方法，实现对中药材人参、西洋参和三七的掺杂鉴定。但是，目前用于检测人参属药材真伪和混伪的DNA分子鉴定方法只能够实现对植物药材和中药饮片的鉴定，而人参配方颗粒作为人参商业生产链中的最终产品，需要经过一系列高温提取和干燥工艺制得，高度加工后的人参配方颗粒中的DNA不能被有效地扩增检出，无法实现人参配方颗粒中原料药材真伪和混伪的分子鉴定。

发明内容

为此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中人参配方颗粒中的DNA不能被有效地扩增检出，无法实现对人参配方颗粒中原料药材DNA 分子鉴定的缺陷，进而提供了一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法。

本发明提供了一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组，包括用于扩增人参18s rDNA的第一引物对，所述第一引物对扩增的基因片段长度为 100bp～200bp；

所述第一引物对识别至少一个SNP分子标记，所述SNP分子标记位于所述人参18srDNA与人参属非人参物种18s rDNA的区别碱基。

所述的引物组，所述人参18s rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SNP分子标记包括SNP分子标记I和SNP分子标记II；

所述SNP分子标记I位于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第497位碱基，所述SNP分子标记I的多态性为G/C；