[发明专利]一个用于区分五个辣椒栽培种的InDel标记引物对及其应用有效
申请号: | 201810499212.7 | 申请日: | 2018-05-23 |
公开(公告)号: | CN108517373B | 公开(公告)日: | 2021-10-19 |
发明(设计)人: | 郭广君;王述彬;潘宝贵;刘金兵;刁卫平;戈伟;高长洲 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 傅婷婷;夏平 |
地址: | 210014*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一个 用于 区分 五个 辣椒 栽培 indel 标记 引物 及其 应用 | ||
1.SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel标记引物对在区分五个辣椒栽培种中的应用,其特征在于以提取的辣椒基因组DNA为模板,利用SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel标记引物对进行PCR扩增,对PCR扩增 产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,如果有133bp的分子标记谱带,则为一年生辣椒(Capsicum annuum);如果有135 bp的分子标记谱带,则为灌木状辣椒(Capsicum frutescens);如果有138 bp的分子标记谱带,则为中国辣椒(Capsicum Chinese);如果有141 bp的分子标记谱带,则为下垂辣椒(Capsicumbaccatum);如果有148 bp的分子标记谱带,则为柔毛辣椒(Capsicum Pubescens)。
2.一个区分五个辣椒栽培种的Indel标记方法,其特征在于包括以提取的辣椒基因组DNA为模板,利用SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel标记引物对进行PCR扩增,对PCR扩增 产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,如果有133 bp的分子标记谱带,则为一年生辣椒(Capsicum annuum);如果有135 bp的分子标记谱带,则为灌木状辣椒(Capsicumfrutescens);如果有138 bp的分子标记谱带,则为中国辣椒(Capsicum Chinese);如果有141 bp的分子标记谱带,则为下垂辣椒(Capsicum baccatum);如果有148 bp的分子标记谱带,则为柔毛辣椒(Capsicum Pubescens)。
3.根据权利要求2所述的区分五个辣椒栽培种的Indel标记方法,其特征在于PCR反应体系:50 ng/μl的DNA模板0.5μl;10 μmol/L的权利要求1中所述的引物对0.5μl;10×PCRbuffer 1.0μl;25 mmol/L MgCl2 1.0μl;10mmol/L dNTPs 0.25μl;5U/μl Taq DNAPolymerase 0.1μl;ddH2 O 6.65μl;或者采用50 ng/μl的DNA模板0.5μl;10 μmol/L的引物对0.5μl ;2×GoTaq®GreenMaster Mix 5μl;ddH2 O 3μl;反应程序:94℃预变性3 min;每个循环94℃变性20 sec,55℃退火 30 sec,72℃延伸40 sec,共30个循环;最后72℃延伸7min。
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