[发明专利]一种生物素标记的依布硒啉探针及其制备方法和应用

说明书

本发明属于蛋白质检测技术领域，具体涉及一种生物素标记的依布硒啉探针及其制备方法和应用。本发明探针结构式如下所示：本发明制备的依布硒啉生物素探针，结构稳定，合成简单，能够快速标记硫醇小分子以及依布硒啉能够共价靶向的蛋白，并能够通过生物素对所靶向的蛋白进行富集，再利用质谱对蛋白的种类进行鉴定。本发明探针对探究依布硒啉的作用机制具有深远的影响。

技术领域

本发明属于蛋白质检测技术领域，具体涉及一种生物素标记的依布硒啉探针及其制备方法和应用。

背景技术

依布硒啉(Ebselen)是一种有机硒化合物小分子抗氧化剂，能清除机体内过多的过氧化物，阻断产生自由基的链式反应，因此可治疗多种疾病，如心血管疾病、关节炎、中风、动脉粥样硬化和癌症。此外，依布硒啉还是公认的可充当谷胱甘肽过氧化物酶活性(GPx)模拟物，可以催化一些重要反应来保护细胞成分免受自由基和氧化损伤的。也有研究说明依布硒啉是哺乳动物硫氧还蛋白(TrxR)的极好底物，并充当脱氢抗坏血酸(DHA)还原酶模拟物。然而，依布硒啉作用的分子机制仍不明确，破译依布硒啉的细胞机制迫切需要解决。

多年来，对于能够和依布硒啉进行共价靶向的蛋白的研究多是基于对所要研究的单个或者一类蛋白为对象进行研究的发现，现在只有19种潜在的蛋白质靶点可以被依布硒啉共价靶向。对于在蛋白组范围内能够和依布硒啉进行共价靶向的蛋白的研究还很少见。设计合成依布硒啉生物素化探针对探究依布硒啉所能共价靶向的蛋白的探究将起着十分重要的作用，但已有设计合成的依布硒啉类似物的生物素化探针，不能够更加精准的探究依布硒啉所能共价靶向的蛋白。所以，亟需一种合成简单，检测灵敏的生物素标记的依布硒啉探针。

发明内容

本发明主要目的，是提供一种生物素标记的依布硒啉探针。本发明探针能够在细胞或者组织蛋白组范围内标记依布硒啉所能够靶向的蛋白，这对探究依布硒啉的作用机制具有深远的影响。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明目的之一，提供一种生物素标记的依布硒啉探针，结构式如下所示：

本发明目的之二，提供所述生物素标记的依布硒啉探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)将邻碘苯甲酰氯和对苯二胺进行反应，反应后水洗、分液，水相用CH₂Cl₂萃取两遍后，合并有机相，干燥、旋干、色谱柱分离，得化合物I，结构式如下：

(2)将叔丁氧羰酰基6-氨基己酸、EDCI和HOBT溶解混合，加入三乙胺后，冰浴条件下搅拌均匀，然后加入化合物I，反应24小时，得化合物II，结构式如下：

(3)将碘化亚铜和1，10-邻菲罗啉溶解混合，搅拌均匀后，加入化合物II、硒粉以及碳酸钾，加热反应24小时，反应结束后，将反应液倒入NaCl溶液中，室温搅拌均匀，过滤、水洗、干燥后色谱柱分离，得到化合物III，结构式如下：

(4)将化合物III溶解，冰浴条件下加入三氟乙酸，室温搅拌过夜，得化合物IV，结构式如下：

(5)将生物素、N-羟基丁二酰亚胺和EDCI溶解在DMF中，搅拌均匀，24小时反应后，将混合溶液倾倒在冷水中，所得白色固体即为Biotin-NHS。

(6)将化合物IV和Biotin-NHS溶解混合，加入三乙胺，搅拌均匀，24小时反应即得。

具体的反应过程如下图1所示。