[发明专利]人血白蛋白高表达的人肝细胞系及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种人血白蛋白高表达的人肝细胞系，命名为HepG2N，其特征在于，所述的人肝细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:C201872，保藏日期为2018年4月10日。

2.根据权利要求1所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的人肝细胞系是利用慢病毒载体运载调节蛋白基因组，整合进入原细胞基因组中而得到的细胞系。

3.根据权利要求2所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的慢病毒载体一共包括三种慢病毒颗粒，分别运载三种蛋白复合体的激活元件的调节蛋白基因组，即dCas9-VP64、MS2-p65-HSF1和靶向特异性sgRNA。

4.根据权利要求3所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的激活元件的调节蛋白基因组表达SAM蛋白复合体激活原件，组合成为SAM蛋白复合体。

5.根据权利要求4所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的慢病毒载体内包含有筛选基因，也将一同被整合进入原细胞基因组中。

6.根据权利要求5所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系，其特征在于，所述的筛选基因选自嘌呤霉素、杀稻瘟菌素和潮霉素。

7.一种人血白蛋白高表达的人肝细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)由启动子调控，包含目的基因和筛选基因的质粒；所述启动子选自巨细胞病毒启动子，所述目的基因选自：dCas9-VP64蛋白、MS2-P65-HSF1蛋白和靶向特异性sgRNA；所述筛选基因选自：嘌呤霉素、杀稻瘟菌素和潮霉素；

b)将步骤a)得到的质粒分别和psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞，包装出Lenti dCAS-VP64_Blast、Lenti ALB-MS2_Puro和Lenti MS2-P65-HSF1_Hygro三种慢病毒载体颗粒；

c)将步骤b)得到的慢病毒载体颗粒共感染人肝细胞HepG2；

d)筛选活的，带有Puro、Blast和Hygro抗性基因的人肝细胞。

e)将步骤d)所得人肝细胞传代培养，建立人血白蛋白高表达的人肝细胞系HepG2N。

8.根据权利要求1所述的人血白蛋白高表达的人肝细胞系在生物型人工肝系统中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述人肝细胞系作为生物型人工肝系统中的细胞源。