[发明专利]一种检测鉴定昆虫体内Wolbachia感染的特异性引物、方法和试剂盒

权利要求书

1.特异性扩增引物Tw16s1在检测昆虫体内Wolbachia感染或在制备昆虫体内Wolbachia感染检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物Tw16s1包括正向引物Tw16s1-F和反向引物Tw16s1-R，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示；所述昆虫选自短管赤眼蜂(Trcichogramma pretiosum)、内华达赤眼蜂(Trichogramma nerudai)、微小赤眼蜂(Trichogramma minutum)、卷蛾赤眼蜂(Trichogramma cacoeciae)、食胚赤眼蜂(Trichogramma embryophagum)、甘蓝夜蛾赤眼蜂(Trichogramma brassicae)、螟黄赤眼蜂(Trichogramma chilonis)、广赤眼蜂(Trichogramma evanesscens)、玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)、土耳其斯坦赤眼蜂(Trichogramma tukestanica)或米蛾卵(Corcyra cephalonica)；所述应用不以疾病的诊断或治疗为目的。

2.一种不以疾病的诊断或治疗为目的的检测鉴定昆虫体内Wolbachia感染的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测昆虫总DNA；所述昆虫选自短管赤眼蜂(Trcichogramma pretiosum)、内华达赤眼蜂(Trichogramma nerudai)、微小赤眼蜂(Trichogramma minutum)、卷蛾赤眼蜂(Trichogramma cacoeciae)、食胚赤眼蜂(Trichogramma embryophagum)、甘蓝夜蛾赤眼蜂(Trichogramma brassicae)、螟黄赤眼蜂(Trichogramma chilonis)、广赤眼蜂(Trichogramma evanesscens)、玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)、土耳其斯坦赤眼蜂(Trichogramma tukestanica)或米蛾卵(Corcyra cephalonica)；

S2.以S1的DNA为模板，利用权利要求1所述正向引物Tw16s1-F和反向引物Tw16s1-R作为PCR引物进行PCR扩增反应；

S3.将S2的PCR扩增反应产物电泳检测，若扩增反应产物为612bp的单一条带，则表明待测昆虫中含有Wolbachia。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2所述PCR扩增反应的体系为25μL：DNA模板1μL，10μM Tw16s1-F 1μL，10μM Tw16s1-R 1μL，2×TSINGKE Master Mix 12.5μL，5x GCbuffer 5μL，灭菌水4.5μL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2所述PCR扩增条件为98℃预变性3min；98℃变性10s，65℃退火10s，72℃延伸25s，40个循环；72℃延伸2min。