[发明专利]一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种表达酰基辅酶A-还原酶的基因工程菌，其特征在于，其为在新金色分枝杆菌(Mycobacterium.neoaurum)中整合有至少由强启动子pG13启动表达的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的基因工程菌；较佳地，所述的新金色分枝杆菌的保藏编号为ATCC 25795。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，其为在新金色分枝杆菌中整合有依次含强启动子pG13和酰基辅酶A-还原酶基因phsR的表达载体的基因工程菌；较佳地，所述的表达载体的骨架为质粒pMV306。

3.如权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR来源于放线菌(Actinomycesbovis)、分枝杆菌属(Mycobacterium)或者红球菌属(rhodococcus)；较佳地来源于快速生长型分枝杆菌；更佳地来源于新金色分枝杆菌；

进一步更佳地，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR编码如下蛋白质(i)或(ii)：

(i)具有如序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；

(ii)在限定的氨基酸序列中经过取代，缺失或者叠加一个或几个氨基酸衍生的蛋白质且与蛋白质(i)具有相同的功能；

最佳地，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

4.一种表达载体，其特征在于，其依次含有强启动子pG13和酰基辅酶A-还原酶基因phsR。

5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR来源于放线菌(Actinomycesbovis)、分枝杆菌属(Mycobacterium)或者红球菌属(rhodococcus)；较佳地来源于快速生长型分枝杆菌；更佳地来源于新金色分枝杆菌；

和/或，所述的表达载体的骨架为质粒pMV306。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR编码如下蛋白质(i)或(ii)：

(i)具有如序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；

(ii)在限定的氨基酸序列中经过取代，缺失或者叠加一个或几个氨基酸衍生的蛋白质且与蛋白质(i)具有相同的功能；

较佳地，所述的酰基辅酶A-还原酶基因phsR的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

7.一种如权利要求4-6任一项所述的表达载体在制备如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌中的应用。

8.一种如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌在制备甾体化合物4-BNA中的应用。

9.一种甾体化合物4-BNA的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括将如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌接种于新金色分枝杆菌培养基中发酵，从发酵液中获得甾体化合物4-BNA。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的新金色分枝杆菌培养基中含有用于甾醇助溶的溶剂；所述的溶剂较佳地为表面活性剂或者分散剂；所述的表面活性剂较佳地为羟丙基-β-环糊精；所述的分散剂较佳地为吐温-80。