[发明专利]检测塞尼卡谷病毒的RT-LAMP引物组、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种检测塞尼卡谷病毒的试剂盒，其特征在于包含10×缓冲液、浓度为2.5mM的dNTP、浓度为250μmol/L的Calcain、浓度为25mM的MnCl₂、浓度均为10μmol/L的正向内引物SVV-FIP和反向内引物SVV-BIP、浓度均为10μmol/L的正向环引物SVV-LF和反向环引物SVV-LB、浓度均为10μmol/L的正向外引物SVV-F3和反向外引物SVV-B3、浓度为100mM的MgSO₄、浓度为8U/μL的Bst DNA Polymerase、浓度为5U/μL的AMV逆转录酶；

所述的正向内引物SVV-FIP、反向内引物SVV-BIP、正向外引物SVV-F3、反向外引物SVV-B3、正向环引物SVV-LF和反向环引物SVV-LB的核苷酸序列如下所示：

SVV-FIP：5´-CTGTGTTCAGCAGGCTGGTCG-CGTCGCATCAAGATTACCGG-3´；

SVV-BIP：5´-GGACTGCTCTGGCATTGACCT-CAACCAGAAGGTCGTCACC-3´；

SVV-F3：5´-AGATCCCTGGCTGTCTCG-3´；

SVV-B3：5´-GCCACCTCATTGAAGTCCA-3´；

SVV-LF：5´-GGCACAACCAGAGGGGA-3´；

SVV-LB：5´-TGACATGGTTGATATCATCGCC-3´。

2.权利要求1所述的检测塞尼卡谷病毒的试剂盒在检测塞尼卡谷病毒中的应用，其特征在于：

所述的应用不包含疾病的治疗与诊断目的。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包含如下步骤：

（1）配制RT-LAMP反应体系，具体反应体系如下所示：

10×缓冲液 2.5μL，2.5mM dNTP 5.0μL，250μmol/L Calcain 3.0μL，25mM MnCl₂ 0.5μL，10μmol/L 的SVV-FIP和10μmol/L 的SVV-BIP 共5.0μL，10μmol/L 的SVV-LF和10μmol/L的SVV-LB 共1.5μL，10μmol/L的 SVV-F3和10μmol/L 的SVV-B3 共0.5μL，100mM MgSO₄ 1.5μL，8U/μL Bst DNA Polymerase 1.0μL，5U/μL AMV逆转录酶 0.3μL，待测样品RNA 3.0μL，RNA-free 水补足25μL；

（2）反应：将步骤（1）配制好的反应体系进行RT-LAMP反应；

（3）结果判读。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述的反应的具体条件为：61℃反应50min。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述的结果判读的具体方式为：在白光或紫外光下根据反应前后反应溶液颜色变化即进行结果判定；

其中，白光下，反应后变成绿色的为阳性样品，反应后变成橘黄色的为阴性样品；

紫外光下，反应后变成绿色的为阳性样品，反应后无荧光的为阴性样品。