[发明专利]一种靶向PSMA的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种靶向PSMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向PSMA的嵌合抗原受体CAR-PSMA包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向PSMA的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向PSMA的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的共刺激信号区和第一信号区，所述共刺激信号区包括CD27信号区，所述CD27信号区包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区，所述跨膜区包括CD8跨膜区，所述第一信号区包括CD3ζ信号区。

3.如权利要求2所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述CAR-PSMA的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

4.一种靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括如权利要求1-3任一项所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体。

5.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包括如权利要求1-3任一项所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体CAR-PSMA的编码基因。

6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其特征在于，所述CAR-PSMA的编码基因包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5-6任一项所述的重组病毒载体。

8.一种靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括：

(1)提供靶向PSMA的嵌合抗原受体CAR-PSMA的编码基因，包括从5’端到3’端顺次连接的信号肽的编码基因、靶向PSMA的单链抗体的编码基因、胞外铰链区的编码基因、跨膜区的编码基因和胞内信号区的编码基因，其中，所述靶向PSMA的单链抗体的编码基因包括如SEQID NO：1所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的共刺激信号区和第一信号区，所述共刺激信号区包括CD27信号区，所述CD27信号区的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列；

(2)将所述CAR-PSMA的编码基因插入到pWPXLD载体中，得到pWPXLD-CAR-PSMA重组质粒；

(3)将所述pWPXLD-CAR-PSMA重组质粒与包膜质粒、包装质粒共转染宿主细胞，得到重组慢病毒；

(4)将所述重组慢病毒感染CD3阳性T淋巴细胞，经分离获得靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞。

9.如权利要求8所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，所述包膜质粒为PMD2G，所述包装质粒为psPAX2，所述宿主细胞为HEK293T细胞。

10.一种如权利要求1-3任一项所述的靶向PSMA的嵌合抗原受体、或如权利要求4所述的或如权利要求8-9任一项所述的制备方法制得的靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞、或如权利要求5-6任一项所述的重组病毒载体或如权利要求7所述的宿主细胞在制备预防、诊断和治疗恶性肿瘤的药物中的应用。