[发明专利]一种靶向PSMA的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向PSMA的嵌合抗原受体以及靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向PSMA的嵌合抗原受体可以专一性的靶向PSMA，并以CD27信号区作为共刺激信号区，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤PSMA阳性的肿瘤细胞，更好的维持细胞的活力和杀伤力，且对正常细胞不构成伤害。本发明还提供了一种靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向PSMA的嵌合抗原受体和嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤，在美国前列腺癌发病率在所有恶性肿瘤中居第一位，死亡率居第二位，仅次于肺癌。我国前列腺癌患者的发病率虽远低于西方国家，但近年来呈显著增长趋势。前列腺特异性膜抗原(prostate specific membraneantigen，PSMA)一种新近发现的前列腺癌相关抗原，具有很强的前列腺组织特异性，已成为前列腺癌的诊断及治疗研究过程中一种重要的靶蛋白。正常前列腺细胞上的PSMA并不多，但是细胞发生癌变、生长速度越来越快并开始向周围组织开始浸润的时候，越来越多的PSMA出现在肿瘤细胞表面。此外，研究表明，PSMA可能成为肺癌早期筛查的新标志物和治疗新靶点。

目前，针对前列腺癌这类的恶性肿瘤并没有十分有效的治疗手段。而近年来发展的免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，弥补了传统疗法的弊端，被认为是二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最有发展前途的一种治疗手段。嵌合抗原受体T细胞技术(Chimeric Antigen Receptor–Modified T Cells，CAR-T)作为当前最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到完全清除恶性肿瘤细胞，受到广泛的关注和研究。但是，CART技术目前的应用还局限于血液瘤，对于多种PSMA阳性实体瘤的应用还未有相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向PSMA的嵌合抗原受体以及靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向PSMA的嵌合抗原受体可以专一性的靶向PSMA，并以CD27信号区作为共刺激信号区，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，更好的维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了一种靶向PSMA的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向PSMA的嵌合抗原受体，所述靶向PSMA的嵌合抗原受体CAR-PSMA包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向PSMA的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向PSMA的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的共刺激信号区和第一信号区，所述共刺激信号区包括CD27信号区，所述CD27信号区包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向PSMA的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述CD27信号区的氨基酸序列的氨基端相连，所述CD27信号区的氨基酸序列的羧基端与所述第一信号区的氨基酸序列的氨基端相连。

在本发明中，所述靶向PSMA的嵌合抗原受体能够与PSMA蛋白发生特异性结合，对表达PSMA的肿瘤细胞，特别是实体瘤细胞具有较强的亲和活性。

可选的，所述靶向PSMA的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向PSMA的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:5具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。