[发明专利]快速检测骨关节感染常见细菌的PCR检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种快速检测骨关节感染常见细菌的PCR检测试剂盒及方法，所述试剂盒包括：引物组，所述引物组包括：金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌nuc基因引物、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因引物、化脓链球菌spyM基因引物和铜绿假单胞菌oprI基因引物。由于本发明的检测骨关节感染常见细菌的试剂盒及方法中引物组的设计可以显著降低儿童骨关节常见细菌感染的检测耗时。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种快速检测儿童骨关节感染常见细菌的多重PCR检测试剂盒及方法。

背景技术

儿童软组织、骨关节的感染相对其他部位来说是较少发生的。然而由于儿童免疫系统发育不成熟、免疫功能尚不完善，儿童软组织、骨关节一旦发生感染，轻则延长疗程、增加患儿痛苦，重则引起相关急性并发症。因此对儿童骨科常见细菌的快速、准确检测和鉴别对儿童骨科感染诊断及治疗具有重要意义。儿童骨关节感染的常见细菌有金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、化脓链球菌和铜绿假单胞菌等四种。

国内外对细菌性疾病的检测和诊断技术种类繁多，主要有细菌革兰氏染色、分离培养及生化鉴定、分子生物学技术以及免疫学技术等。其中，聚合酶链式反应(PCR)技术因其简便、快速、高敏感性和高特异性等特点而被广泛应用于细菌的快速检测。然而目前还没有同时针对金黄色葡萄球菌 (MSSA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、化脓链球菌、铜绿假单胞菌四种细菌的快速检测和鉴别的方法。

发明内容

本发明针对现有技术中儿童骨关节感染常见细菌还没有快速检测和鉴别的方法，目的在于提供一种新的检测骨关节感染常见细菌的试剂盒。

本发明的快速检测骨关节感染常见细菌的试剂盒包括：

引物组，所述引物组包括：金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌nuc基因引物、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因引物、化脓链球菌 spyM基因引物和铜绿假单胞菌oprI基因引物。

所述nuc基因引物包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:2所示的下游引物序列；

所述mecA基因引物包括如SEQ ID NO:3所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:4所示的下游引物序列；

所述spyM基因引物包括如SEQ ID NO:5所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:6所示的下游引物序列；

所述oprI基因引物包括如SEQ ID NO:7所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:8所示的下游引物序列。

引物组明细表

在本发明的PCR检测试剂盒中，所述nuc基因引物、mecA基因引物、 spyM基因引物和oprI基因引物的上游引物和下游引物的原始浓度分别为 9～11μmol/L优选10μmol/L。

在本发明的PCR检测试剂盒中，所述多重PCR缓冲液的体积为12.5μL；在所述引物组中，所述nuc基因引物的上游引物和下游引物的体积各为 0.3μL，所述spyM基因引物的上游引物和下游引物的体积各为0.15μL，所述 mecA基因引物的上游引物和下游引物的体积各为0.4μL，所述oprI基因引物的上游引物和下游引物的体积各为0.3μL。

所述PCR检测试剂盒还包括多重PCR缓冲液和多重PCR DNA聚合酶混合液，所述多重PCR缓冲液的体积为12.5μL(多重PCR缓冲液例如可以是TaKaRa公司的RR062A)

在本发明的PCR检测试剂盒中，包括无菌水的阴性对照。