[发明专利]产L-鼠李糖的工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种产L-鼠李糖的基因工程菌的构建方法，所述方法为如下1）-7）中任一种：

1）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶、L-鼠李糖异构酶、甲基乙二醛合酶和甘油脱氢酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A、L-1,2-丙二醇氧化还原酶、NADPH依赖的醛还原酶和磷酸丙糖异构酶的含量和/或活性；

2）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶、L-鼠李糖异构酶和甘油脱氢酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A、L-1,2-丙二醇氧化还原酶、NADPH依赖的醛还原酶和磷酸丙糖异构酶的含量和/或活性；

3）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶和L-鼠李糖异构酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A、L-1,2-丙二醇氧化还原酶、NADPH依赖的醛还原酶和磷酸丙糖异构酶的含量和/或活性；

4）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶和L-鼠李糖异构酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A、L-1,2-丙二醇氧化还原酶和NADPH依赖的醛还原酶的含量和/或活性；

5）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶和L-鼠李糖异构酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A和L-1,2-丙二醇氧化还原酶的含量和/或活性；

6）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶和L-鼠李糖异构酶的含量和/或活性，且降低所述大肠杆菌中醛脱氢酶A的含量和/或活性；

7）提高大肠杆菌中鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶、果糖-1-磷酸酶和L-鼠李糖异构酶的含量和/或活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述1）中，所述鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的编码基因、所述果糖-1-磷酸酶的编码基因和所述L-鼠李糖异构酶的编码基因通过重组载体甲导入所述大肠杆菌中；

所述重组载体甲为将所述鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的编码基因、所述果糖-1-磷酸酶的编码基因和所述L-鼠李糖异构酶的编码基因插入pRB1k载体多克隆位点得到的载体；

所述甲基乙二醛合酶的编码基因和所述甘油脱氢酶的编码基因通过重组载体乙导入所述大肠杆菌中；

所述重组载体乙为将所述甲基乙二醛合酶的编码基因和所述甘油脱氢酶的编码基因插入pBAD载体多克隆位点得到的载体；

所述2）中，所述鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的编码基因、所述果糖-1-磷酸酶的编码基因和所述L-鼠李糖异构酶的编码基因通过所述重组载体甲导入所述大肠杆菌中；

所述甘油脱氢酶的编码基因通过重组载体丙导入所述大肠杆菌中；

所述重组载体丙为将所述甘油脱氢酶的编码基因插入pBAD载体多克隆位点得到的载体；

所述3）-7）中，所述鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的编码基因、所述果糖-1-磷酸酶的编码基因和所述L-鼠李糖异构酶的编码基因通过所述重组载体甲导入所述大肠杆菌中；

或，所述1）-3）中，对所述大肠杆菌中醛脱氢酶A的编码基因、L-1,2-丙二醇氧化还原酶的编码基因、NADPH依赖的醛还原酶的编码基因和磷酸丙糖异构酶的编码基因进行敲除的方法为对所述大肠杆菌进行如下m1）至m4）改造：

m1）将所述大肠杆菌基因组中的醛脱氢酶A的编码基因敲除；

m2）将m1）得到的突变型大肠杆菌基因组中的L-1,2-丙二醇氧化还原酶的编码基因敲除；

m3）将m2）得到的突变型大肠杆菌基因组中的NADPH依赖的醛还原酶的编码基因敲除；

m4）将m3）得到的突变型大肠杆菌基因组中的磷酸丙糖异构酶的编码基因敲除；

所述4）中，对所述大肠杆菌中醛脱氢酶A的编码基因、L-1,2-丙二醇氧化还原酶的编码基因和NADPH依赖的醛还原酶的编码基因进行敲除的方法为对所述大肠杆菌进行上述m1）至m3）改造；

所述5）中，对所述大肠杆菌中醛脱氢酶A的编码基因和L-1,2-丙二醇氧化还原酶的编码基因进行敲除的方法为对所述大肠杆菌进行上述m1）和m2）改造；

所述6）中，对所述大肠杆菌中醛脱氢酶A的编码基因进行敲除的方法为对所述大肠杆菌进行上述m1）改造。