[发明专利]含血管化区和轴突直行髓鞘化区的组织工程脊髓组织构建方法

权利要求书

1.一种含血管化区和轴突直行髓鞘化区的组织工程脊髓组织，其特征在于包含3层同心圆分区：最外层圆环为血管化区，中间层圆环为轴突直行髓鞘化区，最内层圆柱体为中间神经元区。其构建方法包括：a)将过表达血管生成素-1的血管内皮细胞种植于明胶海绵支架构建血管化区。b)将过表达睫状神经营养因子的少突胶质前体细胞种植于脱细胞视神经支架构建轴突直行髓鞘化区。c)将过表达神经营养因子-3或其高亲和力受体TrkC的神经干细胞种植到明胶海绵支架构建中间神经元区。d)将血管化区、轴突直行髓鞘化区和中间神经元区组装成一个整体共培养。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于步骤a)中所述的血管化区的构建包括如下步骤：将骨髓间充质干细胞诱导分化为血管内皮细胞，再通过慢病毒转染使血管内皮细胞过表达血管生成素-1，然后将过表达血管生成素-1的血管内皮细胞种植于圆环状的明胶海绵支架培养7天得到组织工程脊髓组织最外层的血管化区。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于步骤b)中所述的轴突直行髓鞘化区的构建包括如下步骤：将神经干细胞诱导分化为少突胶质前体细胞，再通过慢病毒转染使少突胶质前体细胞过表达睫状神经营养因子，然后将过表达睫状神经营养因子的少突胶质前体细胞种植于圆环状的脱细胞视神经支架培养7天得到组织工程脊髓组织中间层的轴突直行髓鞘化区。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于步骤c)中所述的中间神经元区的构建包括如下步骤：通过慢病毒转染使神经干细胞分别过表达神经营养因子-3或其高亲和力受体TrkC，然后将过表达神经营养因子-3及其高亲和力受体TrkC的细胞按照1∶1的比例种植于圆柱形的明胶海绵支架培养7天得到组织工程脊髓组织最内层的中间神经元区。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于步骤d)为组织工程脊髓组织的血管化区、轴突直行髓鞘化区和中间神经元区分别单独培养了7天后再组装成一个整体，继续共培养7天构建而成的含血管化区和轴突直行髓鞘化区的组织工程脊髓组织。