[发明专利]一种高产L-丙氨酸的基因及其工程菌的构建方法在审
| 申请号： | 201810522882.6 | 申请日： | 2018-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN108660142A | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 康明;张习伟;李霆;王亚森;田晓辉;张仲良 | 申请（专利权）人： | 河北大学;精晶药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12P13/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 林艳艳 |
| 地址： | 071002 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丙氨酸 构建 高产 大肠杆菌染色体 基因工程菌 工程菌 基因 丙酮酸甲酸裂解酶基因 丙氨酸消旋酶基因 生物工程技术领域 大肠杆菌密码子 乳酸脱氢酶基因 丙氨酸脱氢酶 基因表达效率 大肠杆菌 蛋白基因 合成能力 连续传代 优化处理 偏好 敲除 整合 积累 | ||
1.一种高产L-丙氨酸的基因，其特征在于：序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述高产L-丙氨酸的基因的合成方法，其特征在于：根据大肠杆菌的密码子编码偏好，对具有丙氨酸合成能力的L-丙氨酸脱氢酶基因进行人工合成，将tac启动子和转录终止子rrnBT1加入到合成的L-丙氨酸脱氢酶基因的5'和3'端，并添加5'-UTR，得到高产L-丙氨酸的基因。
3.如权利要求2所述的高产L-丙氨酸的基因的合成方法，其特征在于：所述具有丙氨酸合成能力的L-丙氨酸脱氢酶基因选自嗜热脂肪地芽孢杆菌L-丙氨酸脱氢酶基因、球形芽孢杆菌L-丙氨酸脱氢酶基因或枯草芽孢杆菌L-丙氨酸脱氢酶基因。
4.如权利要求2所述的高产L-丙氨酸的基因的合成方法，其特征在于：所述tac启动子序列如SEQ ID NO.2所示。
5.如权利要求2所述的高产L-丙氨酸的基因的合成方法，其特征在于：所述转录终止子rrnBT1的序列如SEQ ID NO.3所示。
6.如权利要求2所述的高产L-丙氨酸的基因的合成方法，其特征在于：所述5'-UTR序列如SEQ ID NO.4所示。
7.一种基因工程菌，其特征在于包含权利要求1所述的高产L-丙氨酸的基因。
8.权利要求7所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)敲除大肠杆菌染色体的丙氨酸消旋酶基因、D-乳酸脱氢酶基因及丙酮酸甲酸裂解酶基因；
(2)将所述高产L-丙氨酸的基因整合到步骤(1)中所得的大肠杆菌染色体的丙氨酸消旋酶基因处后，将L-丙氨酸外运蛋白基因整合到大肠杆菌染色体的β-半乳糖苷酶基因处；
(3)将步骤(2)中所得到的大肠杆菌进行连续传代培养，得到高产L-丙氨酸的基因工程菌。
9.如权利要求8所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于：所述高产L-丙氨酸的基因序列的拷贝数≥1。
10.如权利要求8所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于：所述L-丙氨酸外运蛋白基因序列拷贝数≥1。
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