[发明专利]冷球蛋白的分型鉴定方法

权利要求书

1.一种冷球蛋白的分型方法，包括步骤：

a)将获自受试者的血液样本置于25℃至40℃预热的容器中；

b)所述血液样本凝固后，在25℃至40℃于2000rpm至3500rpm离心3分钟至10分钟，获得血清样本；

c)将血清样本分为两份或以上，置于2℃至8℃：

在24至78小时期间，当血清样本没有云雾状浑浊或沉淀时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性；或者

在24至78小时期间，当血清样本具有云雾状浑浊或沉淀时，将其中一份血清样本置于35℃至40℃保持1至3小时，当浑浊或沉淀消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阳性；当浑浊或沉淀不消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性；

d)当确定所述样本为冷球蛋白阳性时，将另一份血清样本在2℃至8℃于2000rpm至3500rpm进行离心，收集沉淀；

e)用2℃至8℃的生理盐水冲洗步骤d)所得沉淀3次至5次；

f)于35℃至40℃，用pH 9至10的毛细管电泳缓冲液复溶沉淀，获得重悬液；

g)于35℃至40℃，通过毛细管电泳和/或免疫沉淀对所述重悬液进行冷球蛋白分型。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

步骤a)中，将获自受试者的血液样本置于37±1℃预热的容器中；

步骤b)中，所述血液样本凝固后，在37±1℃于2000rpm至3500rpm离心3分钟至10分钟，获得血清样本。

3.根据权利要求1所述的方法，其中：

步骤c)中，在24至78小时期间，当血清样本具有云雾状浑浊或沉淀时，将其中一份血清样本置于37±1℃保持1小时至3小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其中：

在步骤f)和/或g)中，温度为37±1℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其中：

在步骤g)中，用抗IgG重链抗体、抗IgA重链抗体、抗IgM重链抗体、抗κ轻链抗体和抗λ轻链抗体，进行冷球蛋白分型。

6.一种冷球蛋白的分型方法，包括步骤：

a)将获自受试者的血液样本置于37±1℃预热的容器中；

b)所述血液样本凝固后，在37±1℃于2000rpm至3500rpm离心3分钟至10分钟，获得血清样本；

c)将血清样本分为两份或以上，置于4℃：

在24至78小时期间，当血清样本没有云雾状浑浊或沉淀时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性；或者

在24至78小时期间，当血清样本具有云雾状浑浊或沉淀时，将其中一份血清样本置于37±1℃保持1至3小时，当浑浊或沉淀消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阳性；当浑浊或沉淀不消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性；

d)当确定所述样本为冷球蛋白阳性时，将另一份血清样本在4℃于2000rpm至3500rpm进行离心，收集沉淀；

e)用4℃的生理盐水冲洗步骤d)所得沉淀3次至5次；

f)于37±1℃，用pH 9至10的毛细管电泳缓冲液复溶沉淀，获得重悬液；

g)于37±1℃，用抗IgG重链抗体、抗IgA重链抗体、抗IgM重链抗体、抗κ轻链抗体和抗λ轻链抗体，通过毛细管电泳和/或免疫沉淀对所述重悬液进行冷球蛋白分型。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中：

毛细管电泳结果中蛋白峰型尖锐，则所述样本中冷球蛋白是I型冷球蛋白。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中：

毛细管电泳结果中含有两个电泳峰，一个尖锐且一个弥散，则所述样本中冷球蛋白是II型冷球蛋白。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中：

毛细管电泳结果中只有一个弥散的电泳峰时，则所述样本中冷球蛋白是III型冷球蛋白。