[发明专利]冷球蛋白的分型鉴定方法

说明书

本申请涉及冷球蛋白的分型鉴定方法。具体而言，本申请的方法包括步骤：将血清样本置于2℃至8℃，当样本没有云雾状浑浊或沉淀时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性；或者当样本具有云雾状浑浊或沉淀时，将样本置于35℃至40℃保持1.5至3小时，当浑浊或沉淀消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阳性；当浑浊或沉淀不消失时，则确定所述样本为冷球蛋白阴性。当确定所述样本为冷球蛋白阳性时，通过毛细管电泳对所述样本进行冷球蛋白分型。本申请的方法检测迅速、结果准确性高。

技术领域

本申请涉及生物化学领域。具体而言，涉及一种冷球蛋白的分型鉴定方法。

背景技术

冷球蛋白是血清中存在的一种蛋白，其具有遇冷沉淀，遇热又溶解的特性。冷球蛋白于1933年首次报告，1947年Lerner证实其本质为γ球蛋白。这种γ球蛋白也属于免疫球蛋白。

这种冷球蛋白存在于许多临床疾病中，能固定补体产生炎症反应，类似免疫复合物引起的疾病，冷球蛋白血症分三型：

I型冷球蛋白血症常出现于多发性骨髓瘤、Waldenstron巨球蛋白血症、淋巴瘤等；一般在疾病的晚期只有当冷球蛋白含量达5至30g/L时才表现症状；I型冷球蛋白主要为纯的单克隆免疫球蛋白；

II型冷球蛋白血症主要见于慢性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤、Sjogren综合征和类风湿性关节炎，有时也见于多发性骨髓和巨球蛋白血症；II型冷球蛋白是多种免疫球蛋白的混合；

III型冷球蛋白有30％为特异性的，还可见于SLE、Sjogren综合征、类风湿性关节炎、溶血性贫血、淋巴瘤及多种感染(如梅毒、麻风、锥虫病、亚急性细菌性心内膜炎、链球菌感染后肾炎、传染性单核细胞增多症等)；III型冷球蛋白是多克隆免疫球蛋白(徐心等人，血清冷球蛋白定量检测在丙肝肝硬化诊断中的应用研究，陕西医学杂志，2010，39(3)：349-351)。

冷球蛋白在4℃时自发沉淀，加温至37℃时又可溶解，故常利用这种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。取患者外周血，分离出血清置4℃冰箱中，一般在24至72h出现沉淀，若1周仍不出现沉淀者方可判断为阴性(芮宏亮等人，不同检测条件影响冷球蛋白检测结果的实验研究，中华检验医学杂志，2016，39(12)：901-905)。

冷球蛋白检测方法发展缓慢，虽然有各种尝试(1-5)，但是都没有真正应用于临床检测。在欧洲的一项关于冷球蛋白测定的调查中(United Kingdom National ExternalQuality Assurance Scheme)，所有实验室还都采用免疫固定电泳或免疫电泳作为冷球蛋白的鉴定方法。然而，这两种方法都存在明显的缺陷。

有文献报道冷球蛋白鉴定方法包括免疫电泳、免疫固定电泳和免疫印迹法。Musset等人对这三种方法进行了比较并发现：

-免疫电泳的敏感度低，有较高的假阴性率；

-以凝胶为支持介质的免疫固定电泳，由于冷球蛋白中IgM分子量大，会造成凝胶孔的堵塞；

-免疫印迹法具有较高的检测灵敏度和特异性，适合用于冷球蛋白的鉴定。

毛细管电泳技术是一种液相分离技术。与传统的以凝胶为介质的电泳方法相比，对血清蛋白分析的分辨力更强，操作更加简便。1996年Zak K.Shihabi采用毛细管电泳技术对冷球蛋白进行了定量分析，该方法与凝胶电泳相比具有更高的敏感度。但是，无法实现冷球蛋白的分型鉴定。

此外，直接用血清进行毛细管电泳免疫分型技术，用于冷球蛋白检测时容易受到血清中其它蛋白的遮蔽而出现假阴性。

因此，本领域仍需要一种快速、准确且假阳性率低的冷球蛋白分型鉴定方法。

发明内容

根据一些实施方案，提供了一种冷球蛋白的分型方法，包括步骤：