[发明专利]一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法

说明书

本发明属于再生医学技术领域，公开了一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，包括离心、超声波破碎、离心收集等步骤。本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，去除成熟脂肪细胞和SVF细胞，制备得到ECM，有效避免了操作繁琐导致的ECM含量过低和细胞因子损失。本发明方法不加入外源性化学物质制备富含细胞因子的ECM，且制得的ECM中不含有外源性物质，能提高自体脂肪移植和直接作为生物填充材料的有效性。由本发明方法制备得到的脂肪源ECM材料可用于自体移植疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及再生医学技术领域，具体地，涉及一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法。

背景技术

脂肪移植通常被整形外科用来解决轮廓异常和软组织缺损，然而脂肪细胞的存留率和体积填充的作用是不可预知的，因此需要寻求一种新的生物材料。对人类脂肪组织的细胞外基质利用的初步研究显示其在脂肪移植中具有独特的作用。通常情况下，大量的脂肪组织在腹壁成形术、吸脂、塑身和乳房缩小手术过程中作为医疗废弃物被丢弃。至今，研究的热点集中在脂肪移植物获取和处理的优化方面，或者其细胞组分如基质血管片段(SVF)上。然而，非细胞组分的细胞外基质(ECM)同样重要。Young等人研究了使用市售的软组织填充剂，分别采用合成的和天然的聚合物，使用和不使用细胞外基质(ECM)的材料进行脂肪组织工程试验，发现ECM的产品最有可能促进新生脂肪形成，从而促进长期保留。

目前分离ECM的方法，主要是Flynn提出的反复冻融+多次酶解+极性溶剂萃取的方法，该方法不仅耗时长，费用高，操作繁琐，其中细胞因子因多次反复处理丢失殆尽，且需要在特定实验条件下进行，所以在临床方面并无很大的利用价值。因此，现急需开发一种能高效富集ECM且减少细胞因子损失的方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，本发明采用超声波破碎细胞，不需要加入外源性化学物质从而富集ECM，能有效提高ECM含量、降低细胞因子的损失。

本发明的另一目的在于提供所述方法制得的脂肪来源细胞外基质在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，包括如下步骤：

S1.将脂肪组织于1000～10000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；

S2.将S1所得滤液超声破碎，超声破碎条件为30～200W、1～100s；再继续超声破碎，超声破碎条件为10～100W、1～60s；温度25～38℃；

S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～10000rpm条件下离心3～10min；

S4.经S3离心后，若脂肪混合物分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，且油脂层体积占脂肪混合物总体积60％以上，则弃去顶层油脂，取中间层混合物，加等体积生理盐水混匀，于4000～10000rpm条件下离心3～8min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若脂肪混合物不分层或分层不明显，则重复S2～S3。