[发明专利]一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法

权利要求书

1.一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1-5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇5-10ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；

(2)标准溶液的梯度稀释：取震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；

(3)标准曲线的制作：精密量取10-30ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；

(4)样品溶液的制备：取50-100片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取30-70g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂200-400ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到5-10ml，制得样品溶液；

(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；

(6)样品溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；

(7)阴性对照溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

2.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，所述氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为20-40：1-3。

3.根据权利要求2所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3-5min。

4.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，所述乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为80-100：10-20，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为23-27℃、检测波长为245-275nm、流速为1-2ml/min。

5.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的离心机离心的转速为3000-5000rpm、离心时间为10-15min、离心温度为23-27℃。

6.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。

7.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为30-40℃，旋转速度为40-100rpm。

8.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为10-15min。

9.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。