[发明专利]一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法

说明书

本发明公开了一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，涉及药物分析技术领域，包括以下步骤：(1)标准品溶液的制备、(2)标准溶液的梯度稀释、(3)标准曲线的制作、(4)样品溶液的制备：取儿童维D钙咀嚼片，加入液氮研磨成粉末，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，经过离心机离心，用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发；(5)阴性对照溶液的制备、(6)样品溶液的上样、(7)阴性对照溶液的上样，所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3‑5min。本发明操作简单，分离度高，专属性强、检测结果准确可信，适用于大批次、多批量的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测，具有很好的推广价值。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法。

背景技术

维生素D3是胆钙化醇，又称为胆钙化固醇，是维生素D的一种。维生素D3能够提高肌体对钙、磷的吸收，使血浆钙和血浆磷的水平达到饱和程度，促进生长和骨骼钙化，促进牙齿健全，通过肠壁增加磷的吸收，并通过肾小管增加磷的再吸收，维持血液中柠檬酸盐的正常水平并且能够防止氨基酸通过肾脏损失。

维生素D3的稳定性好，是制备制剂时的首选原料。2015年版《中国药典》中收载的维生素D3含量测定方法采用高效液相色谱法，样品的制备需皂化处理，操作烦琐。维生素D3的含量测定大多采用高效液相色谱法，样品需用二甲基亚砜－水溶液提取，正己烷萃取，操作复杂、耗时长。也有少数采用反相高效液相色谱法测定，在流动相中加入二氯甲烷，对色谱柱的损害较大。儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3的含量低，辅料所占比例高，测定难度较大，现有的技术的检测方法是基于皂化法，对皂化液进行液液萃取，合并分次的萃取液后经旋转蒸发装置浓缩后定容，再使用正相色谱，对浓缩液中的干扰物质进行正相分离除杂，最终上机液进入液相色谱分析。上述方法操作过程复杂，液液萃取容易出现待测物提取不完全，两相液面出现乳化等现象；而正相色谱净化往往需要较专业的半制备液相色谱，以上两点均不利于大批量，多批次检验操作。儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3的含量低，现有的技术采用普通的研磨，溶解提取方式得到的溶液，操作方式虽然简单，但是由于维生素D3的相对含量非常低，直接注入高效液相色谱仪，几乎没有峰值，根本检测不到维生素D3。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种操作简单，分离度高，专属性强、检测结果准确可信，适用于大批次、多批量的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法。

一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，包括以下步骤：

(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1-5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇5-10ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；

(2)标准溶液的梯度稀释：震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；

(3)标准曲线的制作：精密量取10-30ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；

(4)样品溶液的制备：取50-100片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取30-70g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂200-400ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到5-10ml，制得样品溶液；

(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；