[发明专利]一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法

权利要求书

1.一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，所述活菌数量检测方法包括以下步骤：

(1)预处理：将待测的包埋型益生菌产品置无菌研钵中研磨至细粉；

(2)制备菌体悬液：称取1-5mg步骤(1)中制备的细粉，加到50ml离心管中，加入30-50ml稀释缓冲液，涡旋震荡器震荡充分溶解包埋层，得到菌体悬液；

(3)梯度稀释：震荡混匀步骤(2)制得的菌体悬液，取1-5ml混匀后的菌体悬液，加入稀释缓冲液稀释成4个浓度梯度，对应的稀释倍数为5-15倍、50-150倍、500-1500倍、5000-15000倍，得到梯度稀释液；

(4)菌落培养：吸取步骤(3)中的梯度稀释液加到无菌培养皿中，加入MRS培养基混匀，静置，凝固后，封口膜封口，倒置于培养箱进行培养；

(5)菌落计数：对步骤(4)中的培养皿进行菌落计数，得活菌检测结果；

所述步骤(2)和步骤(3)中所述的稀释缓冲液由如下重量百分比的物质组成：KH₂PO₄0.3-0.6％，Na₂HPO₄0.5-0.7％，NaCl0.6-1.0％，吐温80 0.5-1.5％，聚乙二醇0.05-0.1％，聚氧丙烯甘油醚0.01-0.1％，β-环状糊精0.04-0.08％，余量为纯化水。

2.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述的MRS培养基由如下重量份的物质组成：蛋白胨9-11份，牛肉膏9-11份，酵母膏4-6份，柠檬酸氢二铵1-3份，葡萄糖15-25份，吐温80 0.5-1.5份，乙酸钠4-6，磷酸氢二钾1-3份，磷酸镁0.5-0.6份，硫酸锰0.2-0.3份，琼脂15-20份，蒸馏水500-1000份。

3.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述的MRS培养基的pH为6.2-6.6。

4.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述梯度稀释液与所述MRS培养基的体积比为1：(100-150)，所述菌落培养的培养温度为37±1℃，所述菌落培养的时间为24-48h。

5.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，步骤(5)所述菌落计数方法为：选取菌落数在30-300之间的培养皿进行计数。

6.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，步骤(5)所述菌落计数时设计了空白对照组，所述空白对照组的对照品为步骤(2)中的稀释缓冲液。

7.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，所述的研钵、50ml离心管、稀释缓冲液、MRS培养基和培养皿使用前都经过121℃，25min的高压灭菌处理。

8.根据权利要求1所述的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，所述所有处理操作均在超净工作台上进行。