[发明专利]一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法

说明书

本发明公开了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，涉及益生菌产品技术领域，包括以下步骤：(1)预处理、(2)制备菌体悬液、(3)梯度稀释、(4)菌落培养、(5)菌落计数：对步骤(4)中的培养皿进行菌落计数，得活菌检测结果，步骤(2)中所述的稀释缓冲液由如下重量百分比的物质组成：KH₂PO₄ 0.3‑0.6％，Na₂HPO₄ 0.5‑0.7％，NaCl 0.6‑1.0％，吐温80 0.5‑1.5％，聚乙二醇0.05‑0.1％，聚氧丙烯甘油醚0.01‑0.1％，β‑环状糊精0.04‑0.08％，余量为纯化水。本发明加入吐温80作为表面活性剂，促进包埋层溶解，让益生菌得到全部释放，添加聚氧丙烯甘油醚、β‑环状糊精，消除泡沫以及异味，计数误差小，检测结果可靠，严格无菌操作，避免杂菌污染，检测结果可信度高，有很好的推广价值。

技术领域

本发明涉及益生菌产品技术领域，具体涉及一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法。

背景技术

益生菌(Probiotics)是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。

益生菌是一个适合在低温环境下生存的菌种，2001年3月中国卫生部发布了卫法监发〔2001〕84号，益生菌类保健食品评审规定第十条明确指出不提倡以液态形式生产益生菌类保健食品活菌产品因益生菌已经过科学实验认证液态存活非常难，且益生菌怕水，所以消费者在购买益生菌的时候一定要选择冷藏运输，或者在超市冰柜冷藏柜中的益生菌粉状而其他一些液态饮料以及网络销售的无冷藏运送的产品益生菌存活非常低。由于人体内的胃酸、胆汁及各种消化酶的不良影响，益生菌到达肠道时其存活率极大地降低，因此，人们通常会服用包埋型益生菌产品，包埋层的存在使益生菌获得一定的可以抵御胃酸、胆汁和消化酶的能力，最后能以较高的活菌数定值于肠黏膜上发挥作用。

包埋型益生菌因受到包埋物质的保护作用，一般传统计数分析方法无法有效地将包埋层溶离使活菌适当释放而连带影响分析结果。吐温80是一种温和的表面活性剂，表面活性剂的作用是增加憎水性物质与水相融的能力，如常用于某些中草药注射液，以免其少量难溶性成分的析出，加入量为1％一2％。因此将吐温80加入到稀释缓冲液中能够促进活菌的释放，使分析结果更加准确可信。活菌计数的原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落，通过计算培养基中菌落的数量来计算活菌数，因此培养基必须澄清干净，但是吐温80作为表面活性剂有较强的发泡能力，在使用的过程中会产生大量的泡沫，不利于准确计量，并且吐温80有异味，活菌检测过程中异味污染检测空间，使检测人员带来不适感。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，解决了现有技术中检测误差大，结果不科学的问题。

一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，所述活菌数量检测方法包括以下步骤：

(1)预处理：称取适量待测的包埋型益生菌产品置无菌研钵中研磨至细粉；

(2)制备菌体悬液：称取1-5mg步骤(1)中制备的细粉，加到50ml离心管中，加入30-50ml稀释缓冲液，涡旋震荡器震荡充分溶解包埋层，得到菌体悬液；

(3)梯度稀释：震荡混匀步骤(2)制得的菌体悬液，取1-5ml混匀后的菌体悬液，加入稀释缓冲液稀释成4个浓度梯度，对应的稀释倍数为5-15倍、50-150倍、500-1500倍、5000-15000倍；

(4)菌落培养：吸取步骤(3)中的梯度稀释液加到无菌培养皿中，加入MRS培养基混匀，静置，凝固后，封口膜封口，倒置于培养箱进行培养；