[发明专利]一种土霉素季铵盐的制备方法

权利要求书

1.一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：包括以下步骤：

（1）孢子制备：

将龟裂链霉菌经无菌手续接入麸皮、琼脂和水组成的斜面培养基中，在36.0-36.4℃的温度、56-60％的相对湿度条件下培养4-5天后，挑选菌落正常无污染的孢子作为种子；

（2）种子制备：

将步骤（1）挑选得到的孢子接入一级种子罐，在32-34℃下培养至培养液为黄色，且培养液的pH值达到6.0-6.4后，将培养液移至二级种子罐，继续在32-34℃下扩大培养38-42h；

（3）发酵：

将步骤（2）得到的培养液在32-33℃下发酵110-140h，通氧量为0.9-1.1v/m，当培养液的pH＜6.4时，开始通入液氨，直至pH在6.4-6.8之间；

（4）酸化和纯化：

用0.01mol/L的盐酸与0.1mol/L的草酸将步骤（3）所得发酵液调节至pH为1.70-1.74，随后向发酵液中加入纯化剂，搅拌后过滤，得到滤液；

（5）脱色：

将滤液用复合脱色剂进行脱色处理20-40分钟，过滤；

（6）干燥：

将脱色后的滤液进行干燥，得到土霉素干品，控制水分为4%-7%；

（7）溶解结晶：

将蒸馏水搅拌并升温至55-60℃，加入盐酸调节pH值为6.0-6.5，继续升温至62-68℃，投入步骤（6）制得的土霉素干品，搅拌至土霉素全部溶解，再加入备好的DTAC，继续搅拌，继续加入称量好的氢氧化钙，料液pH值控制在9.0-10.0之间，结晶，静置，离心分离；

（8）干燥：

将步骤（7）得到的湿成品装入双锥干燥器内，控制烘干温度90±5℃，真空度≤-0.07MPa，进行干燥，粉碎过筛，称重，分装即得土霉素季铵盐；

在所述的步骤（3）中，在发酵的同时加入由烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活性试剂，烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐的重量比为：3.5-4.5:1；

在所述的步骤（4）中，纯化剂为硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷组成的复合试剂，硫酸锌、高铁酸钾、烷基糖苷的重量比为：2.5-3.0:5.3-5.7:1。

2.如权利要求1所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：在所述的步骤（1）中，斜面培养基的各组分的质量份数为：麸皮5-15份、琼脂5-10份、水80-100份。

3.如权利要求1所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：复合活性试剂的添加量为培养液重量的0.2-0.6%。

4.如权利要求1所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：纯化剂的添加量为发酵液重量的0.15-0.25%。

5.如权利要求1所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：在所述的步骤（5）中，复合脱色剂各组分的质量份数为：活性炭25-35份、ADS-7大孔吸附树脂10-20份、D1400大孔吸附树脂10-20份、NKA-9型大孔吸附树脂8-12份。

6.如权利要求5所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：复合脱色剂的添加量为滤液重量的1.0-2.0%。

7.如权利要求1所述的一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：在所述的步骤（7）中，蒸馏水、土霉素干品、DTAC、氢氧化钙的重量比为：3.5-4.5:1:0.30-0.35:0.16-0.20。