[发明专利]一种土霉素季铵盐的制备方法

说明书

本发明公开了一种土霉素季铵盐的制备方法，包括孢子、种子制备、发酵、酸化、纯化、脱色、干燥、溶解结晶等步骤，发酵步骤中加入烟酸和D‑氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活化剂，用硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷进行发酵液的纯化，脱色步骤选用复合脱色剂，制得的土霉素季铵盐产品不仅收率和纯度高，而且脱色效果好，同时缩短了发酵步骤的时间。

技术领域

本发明涉及一种抗生素的制备，特别涉及一种土霉素季铵盐的制备方法。

背景技术

土霉素，又称地霉素，氧四环素，化学名为(4s，4aR，5S，5aR，6S，12aS)-N-4-二甲胺基-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-六羟基-6-甲基-1，11-二氧代并四苯-2-甲酰胺，是四环素类抗生素的一种，因结构上含有四并苯基的母核而得名。本品为黄色的结晶粉末，无臭，味苦，在空气中性质稳定，在日光下颜色变暗，在碱性条件下易失效。土霉素的盐酸盐为黄色结晶粉末，有吸湿性，但水分和光线不影响其效用，在室温下可保存一段时间不变质，不失效。

土霉素具有广谱抗病原微生物作用，为快速抑菌剂，高浓度时对某些细菌呈杀菌作用。其作用机制在于药物能特异性地与核糖体30S亚基的A位置结合，阻止氨基酰-tRNA在该位置上的联结，从而抑制肽链的增长和影响细菌或其他病原微生物的蛋白质合成。土霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、化脓性链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌、产气杆菌、贺菌属、耶尔森菌、单核细胞李斯特菌等有较强抗菌活性；此外，土霉素对立克次体、支原体、衣原体、放线菌等也有较强作用。

与土霉素或其盐酸盐相比，土霉素季铵盐的抗菌活性、耐药性方面更胜一筹。尽管土霉素及其盐酸盐的制备工艺早已成熟，但这些工艺中难免用到一些如氰类、胺类等剧毒物质，并且土霉素季铵盐的制备工艺尚处在开发阶段，得到的产品产率和纯度较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种土霉素季铵盐的制备方法，包括孢子、种子制备、发酵、酸化、纯化、脱色、干燥、溶解结晶等步骤，发酵步骤中加入活化剂，用多种纯化剂进行发酵液的纯化，脱色步骤选用复合脱色剂，制得的土霉素季铵盐产品不仅产率和纯度高，而且脱色效果高，缩短了发酵步骤的时间，满足制药领域的要求。

一种土霉素季铵盐的制备方法，包括以下步骤：

(1)孢子制备：

将龟裂链霉菌经无菌手续接入麸皮、琼脂和水组成的斜面培养基中，在36.0-36.4℃的温度、56-60％的相对湿度条件下培养4-5天后，挑选菌落正常无污染的孢子作为种子；

(2)种子制备：

将步骤(1)挑选得到的孢子接入一级种子罐，在32-34℃下培养至培养液为黄色，且培养液的pH值达到6.0-6.4后，将培养液移至二级种子罐，继续在32-34℃下扩大培养38-42h；

(3)发酵：

将步骤(2)得到的培养液在32-33℃下发酵110-140h，通氧量为0.9-1.1v/m，当培养液的pH＜6.4时，开始通入液氨，直至pH在6.4-6.8之间；

(4)酸化和纯化：

用0.01mol/L的盐酸与0.1mol/L的草酸将步骤(3)所得发酵液调节至pH为1.70-1.74，随后向发酵液中加入纯化剂，搅拌后过滤，得到滤液；

(5)脱色：

将滤液用复合脱色剂进行脱色处理20-40分钟，过滤；

(6)干燥：

将脱色后的滤液进行干燥，得到土霉素干品，控制水分为4％-7％；

(7)溶解结晶：