[发明专利]一种用于检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点的引物及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点的引物，其特征在于，所述引物包括位于RTEL1基因rs62315594位点的引物、位于ZGPAT基因rs3761121位点的引物、位于ARFRP1基因rs62335293位点的引物以及位于ZBTB46基因rs5019252位点的引物；

其中，rs62315594位点的引物为F：5′-TGTGTATTCTCCAAACTGC-3′和R：5′-AGGAAGTAGACACGCTGA-3′；

rs3761121位点的引物为F：5′-AGGTGGACGTCTGTAAGA-3′和R：5′-ATGTCTCTATTTCCCTAAGC-3′；

rs62335293位点的引物为F：5′-CACCCATCACACCTACC-3′和R：5′-GTATGTGCTGCTCTAGTGG-3′；

rs5019252位点的引物为F：5′-CAACTCACTTCATGTCTGG-3′和R：5′-AAGAAGTATGTGTGCAAGGT-3′。

2.采用权利要求1所述的引物检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集样品并提取其基因组DNA；

(2)采用所述引物分别对基因组DNA进行目的基因的PCR扩增，并对扩增产物进行胶回收；

(3)对胶回收产物进行浓度测定，计算模板量，然后进行荧光标记PCR反应，并对反应产物进行纯化；

(4)将步骤(3)中的纯化产物上机测序，并对SNP检测结果进行分析。

3.根据权利要求2所述的检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增体系为：DNA模板含量为100-150ng，浓度为5pmol/μL的正向引物3.0μL，浓度为5pmol/μL的反向引物3.0μL，Prime STAR MAX 25.0μL，用ddH₂O补足体积至50μL。

4.根据权利要求2所述的检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火15s，72℃延伸15s，进行35个循环，最后72℃延伸5min。

5.根据权利要求2所述的检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增体系为：DTCS Master Mix 2.5μL，浓度为5pmol/μL的反向引物1.0μL，DNA模板20ng，用ddH₂O补足体积至10μL。

6.根据权利要求2所述的检测脑母细胞瘤易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增反应条件为：94℃预变性30s，94℃变性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，35个循环，最后60℃延伸20min。