[发明专利]一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法在审
| 申请号： | 201810527469.9 | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN108531584A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 彭柯又;张蓉;谭遥;谭玉华 | 申请（专利权）人： | 成都中创清科医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 李林合 |
| 地址： | 610041 四川省成都市中国（四川）自*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 脑中风 位点 易感性 检测 胶回收 荧光标记PCR 引物特异性 纯化产物 目的基因 引物检测 提取DNA 多态性 可预测 灵敏度 测序 上机 采集 分析 | ||
1.一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物，其特征在于，所述引物包括位于PRKCH基因的rs2230500位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs266729位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs822391位点的引物以及位于ADIPOQ基因的rs822396位点的引物；
其中，rs2230500位点的引物为F：5′-ACTGTTTGGGTTGAAGTAAG-3′和R：5′-GTCTCAGCTCTGTAAGAAAAG-3′；
rs266729位点的引物为F：5′-GCCTAATGTGACTTCTCTTG-3′和R：5′-CCTGTTTTTCCAGTTCCTT-3′；
rs822391位点的引物为F：5′-CAAGTCTCAGGTTCTCCTAC-3′和R：5′-CCCAGAAATCACCTCAC-3′；
rs822396位点的引物为F：5′-TTACAATCAGAGTCCGTTC-3′和R：5′-TAAACTTCCTCACTGCTTG-3′。
2.采用权利要求1所述的引物检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采集样品并提取其基因组DNA；
(2)采用所述引物分别对基因组DNA进行目的基因的PCR扩增，并对扩增产物进行胶回收；
(3)对胶回收产物进行浓度测定，计算模板量，然后进行荧光标记PCR反应，并对反应产物进行纯化；
(4)将步骤(3)中的纯化产物上机测序，并对SNP检测结果进行分析。
3.根据权利要求2所述的检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增体系为：DNA模板含量为100-150ng，浓度为5pmol/μL的正向引物3.0μL，浓度为5pmol/μL的反向引物3.0μL，Prime STAR MAX 25.0μL，用ddH2O补足体积至50μL。
4.根据权利要求2所述的检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火15s，72℃延伸15s，进行30个循环，最后72℃延伸5min。
5.根据权利要求2所述的检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增体系为：DTCS Master Mix 2.5μL，浓度为5pmol/μL的反向引物1.0μL，DNA模板20ng，用ddH2O补足体积至10μL。
6.根据权利要求2所述的检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增反应条件为：94℃预变性30s，94℃变性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，30个循环，最后60℃延伸20min。
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