[发明专利]一种用于检测卵巢癌基因多态性位点的引物及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测卵巢癌基因多态性位点的引物，其特征在于，所述引物包括rs2276109位点的引物、rs2252070位点的引物、rs11782652位点的引物以及rs757210位点的引物，各引物的具体序列如下：

rs2276109-上游引物：5′-TGTCCATACTTACTTCACCA-3′；

rs2276109-下游引物：5′-TCTCCTTCTCTTTTAGTTGC-3′；

rs2252070-上游引物：5′-TGGCAAGATACTCTACCTCT-3′；

rs2252070-下游引物：5′-CTTCAGGTAGACACAAGACA-3′；

rs11782652-上游引物：5′-ATGAAAGGCACCACATT-3′；

rs11782652-下游引物：5′-GATCATTCTTACCCATTCC-3′；

rs757210-上游引物：5′-TGTGAACAGACACAATAACG-3′；

rs757210-下游引物：5′-CTGAAGGGAAGTAGAGAAGA-3′。

2.一种检测卵巢癌基因多态性位点的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取受检者全基因组DNA；

(2)以步骤(1)中所得DNA为模板，采用权利要求1中所述引物对其进行PCR扩增；

(3)回收扩增产物，并进行浓度测定，计算模板量，再次进行PCR扩增并对扩增产物进行纯化，最后通过序列分析仪对SNP分型进行分析确定。

3.根据权利要求2所述的检测卵巢癌基因多态性位点的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增的扩增体系为：Primer STAR MAX 12.5μL、Primer F1.5μL、Primer R 1.5μL、DNA 2μL，最后用H₂O补足至25μL。

4.根据权利要求2所述的检测卵巢癌基因多态性位点的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性10s，55℃退火10s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸2min后于4℃保存。

5.根据权利要求2所述的检测卵巢癌基因多态性位点的方法，其特征在于，步骤(3)中所述PCR扩增的扩增体系为：DTCS Master Mix 2.5μL、Primer R 1.0μL、模板DNA 3μL，最后用灭菌超纯水补足至10μL。

6.根据权利要求2所述的检测卵巢癌基因多态性位点的方法，其特征在于，步骤(3)中所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性30s，94℃变性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，30个循环，最后60℃延伸20min。