[发明专利]一种利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法

说明书

本发明公开了一种利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法，首先将利福平乙醇溶液滴加到丝素蛋白溶液中，低速搅拌，得到的混合溶液置于冰箱中冷冻一段时间，通过自组装法形成纳米微球，经冷冻后的混合溶液呈冰淇淋状，室温下解冻得到利福平负载的丝素蛋白纳米微球悬浮液，离心洗涤，冻干后得到干燥的固体粉末载药微球。本发明通过自组装的方法将利福平负载在丝素蛋白纳米微球上，可以得到粒径较小、分布均一的纳米微球，同时缓释、控释性能良好，具有良好的药物释放性能。

技术领域

本发明涉及一种利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法，属于生物医药领域。

背景技术

肺结核病一直以来困扰着人们的身体健康，而利福平作为一种治疗肺结核病不可缺少的药物，越来越受到人们的重视。治疗肺结核的周期长，通常时间要求在6～9个月以上，但利福平作为抗肺结核药物在体内作用的时间短，需经常服药，且长期服药易产生肝、肾功能障碍并发症。由于治疗周期长，患者的依从性差，易产生耐药菌株，影响疗效。因此，研究缓释、控释型的利福平作用体系对于降低药物的毒副作用、延长体内循环时间、提高生物利用度都具有重要意义。要实现药物的缓释、控释，寻找一种好的药物载体是必不可少的，丝素蛋白纳米粒子由于其高效的生物利用度而成为研究热点。

丝素蛋白作为一种天然蛋白质，具有良好的生物相容性、生物可降解性以及多样化的结晶固化方式，易于保持高度的生物亲和性和特殊的多孔性网状结构，在作为药物缓释载体方面体现出了独特的优势。丝素蛋白分子中独特的疏水、亲水性氨基酸侧链有序排列为其提供了自组装的可能。无规状态的丝素蛋白分子在外界条件的诱导及协同作用下发生构象转变而聚集，使其能在水溶液中或空气-溶液的界面发生自组装。

如专利申请号为201510918623.1的中国发明专利公开了一种用于药物控释的丝素-载药纳微米颗粒的制备方法，是将聚乙二醇溶液与丝素蛋白溶液混合均匀制得共混液，然后将所述共混液孵育一定时间后离心洗涤，制得用于药物控释的丝素-载药纳微米颗粒。但其使用方法制得的纳微米颗粒尺寸大、粒径分布不均，药物释放的周期短，不利于药物的缓释。

发明内容

本发明旨在提供一种利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法，本发明通过自组装的方法将利福平负载在丝素蛋白纳米微球上，可以得到粒径较小、分布均一的纳米微球，同时缓释、控释性能良好，具有良好的药物释放性能。

本发明利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法，首先将利福平乙醇溶液滴加到丝素蛋白溶液中，低速搅拌，得到的混合溶液置于冰箱中冷冻一段时间，通过自组装法形成纳米微球，经冷冻后的混合溶液呈冰淇淋状，室温下解冻得到利福平负载的丝素蛋白纳米微球悬浮液，离心洗涤，冻干后得到干燥的固体粉末载药微球。

本发明利福平负载丝素蛋白纳米微球的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：将已脱胶的蚕丝浸润在9.3mol/L的LiBr溶液中，60℃溶解4h，溶解后获得的丝素蛋白溶液倒入截留量为14000的透析袋中用去离子水透析3d，透析结束后将丝素蛋白溶液以8000rpm的转速离心10min去除不溶物杂质，然后倒入截留量为14000的透析袋中，用分子量20000、10wt％的聚乙二醇溶液进行反透析，获得浓缩的丝素蛋白溶液，以去离子水稀释得到浓度梯度为2～5wt％的丝素蛋白溶液；

步骤2：取药物利福平0.003～0.005g定溶于5mL乙醇中，得到0.6～1.0mg/mL的利福平乙醇溶液，随后滴加至步骤1获得的丝素蛋白溶液中，在转速100～200rpm/min下搅拌2～5min，得到的混合溶液置于-20℃下冷冻24h；

步骤3：取出冷冻后的混合溶液，室温下解冻得到药物利福平负载的丝素蛋白纳米微球悬浮液，加入乙醇溶液稀释，12000rpm下离心洗涤30min，重复2～3次，去除上层溶液，将所得沉淀于-50℃下冷冻干燥24h，得到利福平负载丝素蛋白纳米微球粉末。

本发明的有益效果体现在：