[发明专利]HPV分型检测用的核酸组合物及应用

说明书

本发明涉及一种HPV分型检测用的核酸组合物、检测芯片及其制作方法、检测试剂盒及其使用方法。该HPV分型检测用的核酸组合物，包括PCR扩增引物和检测探针。其中，PCR扩增引物包括用于扩增HPV病毒L1区的变异区域的病毒PCR扩增引物对。所述检测探针包括14个序列或互补序列中含有分别如SEQ ID NO:1～14所示序列的病毒寡核苷酸探针。该HPV分型检测用的核酸组合物针对HPV病毒L1区的变异区域设计病毒PCR扩增引物对，因而，一次PCR扩增就能将含有14个高危型HPV的变异区域的目标片段扩增出来，再针对各HPV类型设计特异性的病毒寡核苷酸探针，一次扩增就能检测14个HPV亚型，整个检测过程简单，高效。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体是涉及一种HPV分型检测用的核酸组合物及应用，尤其是涉及一种HPV分型检测用的核酸组合物、检测芯片及其制作方法、检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是一种含有约8000个碱基对的双链环状DNA病毒，有100多种类型，是一类致瘤病毒。根据致瘤程度分为高危型HPV和低危型HPV，其中至少14种可引起癌症(又称高风险类型，即高危型)，常在宫颈瘤中检出，严重威胁广大妇女的身体健康，其长期感染是导致宫颈癌变的重要原因。长期感染是一个渐进的过程，早期感染清除能减少或避免癌变，也能对症治疗，特别是在目前发病率日益增高且呈年轻化的趋势的情况下，HPV的筛选、预防、诊断和治疗是一个急需解决的问题。

世界卫生组织早在2015年3月发布的实况报导第380号《人乳头状瘤病毒和宫颈癌》中就指出“人乳头状瘤病毒(16型和18型)引起70％的宫颈癌和宫颈癌癌前病变，估计2012年有44.5万个新发病例，占全球新发病例的84％。2012年，约有27万妇女死于宫颈癌，其中85％以上发生在低收入和中等收入国家。”美国癌症学会2016年报告“美国女性子宫宫颈癌以7％发病率排行第四，死亡率排行第五”。我国也早将宫颈癌筛查列入癌症筛查与早期发现项目，在全国开展普查筛选。

早期对宫颈癌的筛查与诊断，主要采用形态学的检查，例如巴氏涂片、液基细胞学(LCT、TCT)、组织蜡片等。感染了HPV病毒的上皮细胞可出现形态学上的改变，但也会有部分出现未确定意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUSS)，从而出现假阴性结果，需要结合其它检测或分子生物学技术检测HPV病毒感染。

分子生物学技术检测包含几种常用的方法：核酸分子杂交如southern杂交、northern杂交、原位杂交等，灵敏度较高，但操作步骤较复杂，要求较高，临床应用较少；核酸扩增PCR荧光检测，灵敏度较高，操作简单，但高灵敏度容易导致假阳性，仪器设备价格较高，难以普及；杂交捕获法，通过特定探针直接检测样本病毒，不用经过PCR扩增，但检测仅能显示是否感染HPV不能进行分型；基因芯片法，在PCR扩增的基础上加入探针芯片法，可同时检测多个分型，成本较低，易于推广，但是步骤繁琐，检测背景深，容易出现假阳或假阴，技术需要加以改进；微流控全自动核酸检测系统，结合多种检测技术可实现多种分子诊断实验室功能，全自动，全封闭，多检测，但多功能结合，其具体的灵敏度、准确率有待实验验证。

目前市面上的HPV检测产品种类多，大多采用PCR荧光或杂交与其他技术结合的方式，但不同技术间的结合还存在灵敏度、背景、效率的问题，难以对HPV进行准确分型。因此研制和开发一种能同时检测多个分型HPV病毒的检测产品显得尤为重要。

发明内容

基于此，有必要提供一种HPV分型检测用的核酸组合物、检测芯片及其制作方法、检测试剂盒及其使用方法。

一种HPV分型检测用的核酸组合物，包括PCR扩增引物和检测探针；

所述PCR扩增引物包括用于扩增HPV病毒L1区的变异区域的病毒PCR扩增引物对；

所述检测探针包括14个序列或互补序列中含有分别如SEQ ID NO:1～14所示序列的病毒寡核苷酸探针。