[发明专利]棉花遗传转化中产生正常苗的培养基及方法

权利要求书

1.棉花遗传转化中产生正常苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 培育无菌苗，取无菌苗下胚轴切段；

S2. 制备浸染液；

S3. 使用浸染液侵染下胚轴切段，进行共培养；

S4. 对共培养后的下胚轴切段进行诱导筛选培养，获得愈伤组织；

S5. 使用无激素的增殖培养基对诱导筛选培养后的愈伤组织进行增殖培养，至愈伤组织分化，形成胚性愈伤组织;

所述增殖培养基由如下组分组成：维生素B1 8-12 mg/L，葡萄糖28-32 g/L，Phytagel2.8-3.0 g/L和无机盐，pH 6.8；其中，所述无机盐为MS培养基中的无机盐，并且无机盐中的硝酸钾浓度加倍；余量为水；

S6. 将胚性愈伤组织转入分化培养基进行透气培养，10-15 d继代一次，连续继代3-5次直至出现胚状体；

所述分化培养基以所述增殖培养基为基础，去掉无机盐中的硝酸铵成分，添加天冬素0.45-0.55 g/L，谷氨酰铵0.8-1.2 g/L，并且Phytagel浓度为3.5-3.9 g/L，葡萄糖浓度为20-25 g/L；

S7. 胚状体形成后降低培养基中糖含量，利用成苗培养基继续继代培养，得到再生植株；

所述成苗培养基以所述分化培养基为基础，并且Phytagel浓度为3.2-3.3 g/L，葡萄糖浓度为15-25 g/L；

所述S3具体步骤如下：

使用浸染液浸染下胚轴切段5-10min，将浸染后的下胚轴切段放入共培养培养基上，22-24℃暗培养48h；

所述共培养培养基以所述增殖培养基为基础，添加2,4-D 0.08-0.12 mg/L， KT 0.08-0.12 mg/L；

所述S4具体步骤如下：

S41. 经共培养后的下胚轴段放入第一筛选培养基中，培养2个月，获得愈伤组织；

S42. 直径1-2 cm的愈伤组织转入第二筛选培养基中二次筛选培养1个月；小于1 cm的愈伤组织再次转入第一筛选培养基中二次诱导筛选培养1个月；

所述第一筛选培养基以所述增殖培养基为基础，添加2,4-D 0.08-0.12 mg/L，KT0.08-0.12 mg/L，卡那霉素90-110 mg/L，头孢霉素450-550 mg/L；

所述第二筛选培养基以所述增殖培养基为基础，添加卡那霉素90-110 mg/L，头孢霉素450-550 mg/L。

2.根据权利要求1所述的棉花遗传转化中产生正常苗的培养方法，其特征在于，所述S5中25d继代一次，连续继代2-3次，直到愈伤组织分化。

3.根据权利要求1所述的棉花遗传转化中产生正常苗的培养方法，其特征在于，所述S7中再生植株生长至5-8 cm后即可作为接穗嫁接到砧木苗上。