[发明专利]一种水产品微生物致腐能力的评价方法

说明书

本发明公开了一种水产品微生物致腐能力的评价方法。本方法对接种特定微生物的水产品进行贮藏，使用化学方法对其贮藏过程中的挥发性盐基氮(TVB‑N)值和菌落总数(TVC)进行定期检测，将所得数值代入本方法建立的水产品微生物致腐能力计算公式，计算得到水产品微生物致腐能力。本方法在整个贮藏过程的时间跨度范围内进行致腐能力的评价，并可以将同一腐败菌不同贮藏条件下的致腐能力进行比较，是一种有效、综合、便捷、准确的微生物致腐能力评价方法，可广泛应用于水产品微生物致腐能力的评价。

技术领域

本发明涉及微生物评价领域，特别是一种水产品微生物致腐能力的评价方法。

背景技术

水产品口感鲜美，含有丰富的蛋白质和多不饱和脂肪酸，具有很高的食用价值和营养价值。但水产品在贮藏期间容易腐败变质，影响其感官、风味和营养价值。微生物的入侵和繁殖是造成水产品腐败的重要因素。微生物分解水产品中的蛋白质等成分，产生胺类等碱性含氮物。这些物质被称为挥发性盐基氮，其含量与水产品中氨基酸破坏程度呈正相关，造成水产品的腐败，是反映水产品新鲜程度的重要指标。

在水产品的贮藏中，不同种类微生物对于水产品腐败的影响程度与其致腐能力密切相关。因此对不同种类微生物的致腐能力进行测定和研究，有利于对水产品中造成腐败的主要微生物进行筛选和靶向抑制，为延长水产品的货架期提供理论基础。

致腐能力的强弱可以根据感官评价来定性评估，但由于其受主观因素影响较大，因此使用化学腐败指标(如TVB-N值)进行致腐能力的定量评估更为准确。目前大部分报道使用 TVB-N产量因子(Y_TVB-N)进行致腐能力的评价。TVB-N产量因子(Y_TVB-N)将TVB-N值和TVC值结合起来，为使用最多的致腐能力评价方法，但这种方法选取贮藏起点和货架终点的TVB-N 值和TVC值，总共四个点，而没有将腐败期间的过程纳入考量范围，因此具有较大的误差。

发明内容

针对上述不足，本发明提供一种简便、准确，又能全面的表达微生物在水产品腐败过程中致腐能力的评价方法，该方法能够简便、准确，又能全面的表达微生物在水产品腐败过程中致腐能力的评价。

本发明的目的是按如下的方式来实现的：一种水产品微生物致腐能力的评价方法，包括以下步骤：

(1)微生物菌悬液的制备：将冷冻保藏的单菌液在37℃水浴中活化10～20min，并在营养琼脂中划线培养复壮后，挑取典型的单菌落于营养肉汤中，37℃下培养12～24h，离心后弃上清液，并用无菌生理盐水调整到菌悬液浓度6～6.5lg(CFU/g)范围内备用；

(2)无菌水产品制备：将新鲜水产品去内脏后用蒸馏水洗净，在无菌超净台中将处理好的水产品放在灭菌的砧板上，在体积浓度75％的酒精中浸泡10～30s后捞起自然晾干后，再用无菌水洗净；

(3)微生物接种及包装：将上述制备的无菌水产品及单菌稀释菌悬液置于超净台中，将水产品浸泡于菌悬液中，10～30s后取出，放置于相应的包装中，以未接种腐败菌的水产品作对照，并贮藏；

(4)贮藏过程中挥发性盐基氮(TVB-N)值和菌落总数(TVC)的检测：在t₁，t₂，…，t_i，…，t_n时刻均将水产品从贮藏环境中取出，进行挥发性盐基氮(TVB-N)值和菌落总数(TVC)的多次检测，每个时刻检测结果取平均值；

(5)当挥发性盐基氮(TVB-N)值>50mg/100g时，贮藏期结束,利用采集的数据，使用致腐能力计算公式对微生物致腐能力进行计算，得到水产品微生物的致腐能力。

进一步的，所述步骤(3)中，贮藏温度为4～25℃。