[发明专利]一种番茄果实转录因子CNR多克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明提供了一种番茄果实转录因子CNR多克隆抗体及其制备方法，本方法包括：(1)构建含有SEQ ID No：1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得CNR蛋白抗原；(2)将所述CNR蛋白抗原免疫动物，经血清分离纯化获得番茄CNR蛋白多克隆抗体，利用本发明所提供的方法制备的多克隆抗体，能够特异性识别番茄果实的CNR蛋白，而不能识别番茄果实的其他蛋白，在CNR蛋白的检测和功能鉴定、及其研究中具有广泛用途。CNR蛋白抗体的制备为检测番茄转录因子CNR在果实成熟过程中的表达情况及研究CNR蛋白的功能具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种番茄果实转录因子CNR多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

番茄(Solanum lycopersicum Mill.)栽培历史悠久，因其基因组小(950Mb)，生长周期短(坐果到成熟约60d)，且与拟南芥、水稻、玉米等模式植物亲缘关系较远而成为研究肉质果实发育和成熟的模式生物。现已获得大量番茄种质资源、突变体库、高密度遗传图谱、EST资源，且瞬时表达和稳定转化技术成熟。此外，2012年5月完成的栽培番茄全基因组精细序列分析极大地推动了番茄功能基因组学及分子遗传学研究。果实成熟过程涉及到大量代谢途径的调节以及生理生化属性的显著改变，需要对一系列基因的时序性表达进行精密转录调控，因此番茄成熟相关转录因子的功能研究成为植物学领域的研究热点之一。

果实的成熟过程是由许多转录因子单独或协同调控特定的下游基因来完成的(Giovannoni 2007)，其中一类转录因子是SBP box家族。SBP box转录因子参与了植物发育的许多方面(彭华2016)，包括相转变、花器官的建成、果实成熟，植物激素信号转导和铜的体内平衡等(高英2009)。CNR是SBP box转录因子家族中一个比较特殊的成员，它可以在果实的发育、成熟过程中发挥重要作用。目前，关于番茄转录因子CNR的研究主要在转录水平，然而蛋白合成后存在翻译后水平的修饰，蛋白水平才是转录因子CNR发挥作用的水平，而目前关于CNR蛋白的抗体未见报道。

因此有必要提供一种针对番茄CNR蛋白的多克隆抗体，从而为研究和利用该蛋白的生物学功能提供有力工具。

发明内容

本发明的目的在于填补现有对于CNR蛋白的抗体研究的空白，开发一种针对番茄CNR蛋白的多克隆抗体及其制备方法。

一种番茄果实转录因子CNR多克隆抗体的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)构建含有SEQ ID No：1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得重组蛋白抗原；

(2)将所述CNR蛋白抗原免疫动物，经血清分离纯化获得番茄CNR蛋白多克隆抗体。

其中，所述SEQ ID No：1所示核苷酸序列为发明人根据GenBank中已发表的番茄CNR基因mRNA序列(NM_001319308.1)设计引物，并在上游引物与下游引物的5’端分别插入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点，以品种为Lycopersicon esculentum cv.Ailsa Craig的番茄果实提取mRNA后反转录得到的cDNA为模板，经PCR扩增得到的。

可选的，所述重组表达载体是将含有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的片段克隆至原核表达载体获得的。

可选的，所述CNR蛋白抗原含有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

本发明对于所使用的大肠杆菌感受态细胞的种类没有特别的限制，只要能够适合重组表达载体在细胞中有效表达即可，优选的情况下，为了获得更好的表达效果，大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌Rosetta感受态细胞。

在本发明中，可以利用本领域常规适合于重组蛋白抗原的原核表达载体，优选的情况下，当所述原核表达载体为pET-30a时，重组蛋白抗原的表达效果更好。