[发明专利]一种双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法及应用有效
| 申请号： | 201810535769.1 | 申请日： | 2018-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN108721634B | 公开（公告）日： | 2021-06-04 |
| 发明（设计）人： | 赵永星;张楠;杨亚楠;杨静 | 申请（专利权）人： | 郑州大学 |
| 主分类号： | A61K47/54 | 分类号： | A61K47/54;A61K47/62;A61K47/66;A61K47/64;A61K38/10;A61K38/16;A61P31/04;A61P35/00 |
| 代理公司： | 郑州优盾知识产权代理有限公司 41125 | 代理人： | 孙诗雨 |
| 地址： | 450001 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 双靶点 dna 纳米 治疗 体系 构建 方法 应用 | ||
1.一种双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将六条单链直链DNA溶于体外缓冲盐溶液中，退火自组装形成DNA四面体溶液；
（2）向5'端C6氨基修饰的ssDNA溶液中加入交联剂Sulfo-SMCC粉末，于pH7-9、磁力搅拌条件下，室温反应2h，经透析去除未反应的交联剂，可得ssDNA-SMCC，然后加入多肽粉末，于pH6.5-7.5、磁力搅拌条件下，室温反应12h，经透析去除过量的多肽，即得ssDNA-peptide产物；
（3）向步骤（1）得到的DNA四面体溶液中加入ssDNA-peptide，以2 min/℃的速度从40℃降至20℃，完成双靶点DNA纳米治疗体系的构建；
所述步骤（1）中六条单链直链DNA序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6。
2.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）中体外缓冲盐溶液为pH8.0的10mM Tris∙HCl和5mM MgCl2溶液。
3.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）中退火条件为95℃保持5min，10s内由95℃降温至4℃，4℃保持30s。
4.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）中DNA四面体的平均粒径为8-12nm。
5.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）中5'端C6氨基修饰的ssDNA为ssDNA-FAS、ssDNA-TFM或二者的混合物，其中ssDNA-FAS序列为SEQ ID NO：7所示，ssDNA-TFM序列为SEQ ID NO：8所示，ssDNA的物质的量浓度为0.5μΜ，ssDNA：Sulfo-SMCC的物质的量比为1:110。
6.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（2）中多肽为FAS多肽、TFM多肽或二者的混合物，FAS多肽序列为SEQ ID NO：9所示，TFM多肽序列为SEQ ID NO：10所示，ssDNA-SMCC与多肽的物质的量比为1:10。
7.如权利要求1所述的双靶点DNA纳米治疗体系的构建方法，其特征在于：所述步骤（3）中DNA四面体：ssDNA-peptide的物质的量比为1:1。
8.如权利要求1-7任一项所述的双靶点DNA纳米治疗体系在制备用于靶向肿瘤治疗的药物试剂中应用。
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