[发明专利]在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒

权利要求书

1.一种在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的非诊断目的的方法，其特征在于，包括以下步骤：

抽提外周血游离DNA；

使用由序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列组成的引物对和探针，分别对外周血游离DNA及质控对照DNA样品在高温变性条件下和低温变性条件下进行实时荧光定量PCR扩增，得到P53基因待测区域片段xn的△Ct _xn及质控对照DNA样品xn'的△Ct _xn'；

其中，△Ct _xn=|Ct _xn-HT–Ct _xn-LT|，Ct _xn-LT表示P53基因待测区域片段xn在低温变性条件下扩增的Ct值；Ct _xn-HT表示P53基因待测区域片段xn在高温变性条件下扩增的Ct值；

△Ct _xn'= |Ct _xn'_-HT–Ct _xn'_-LT|，Ct_xn'_-LT表示质控对照DNA样品xn'在低温变性条件下扩增的Ct值；Ct _xn'_-HT表示质控对照DNA样品xn'在高温变性条件下扩增的Ct值；

比较△Ct _xn与△Ct _xn'的差异判定外周血游离DNA中P53基因待测区域片段xn是否存在表观遗传学修饰：当△Ct _{xn =}△Ct _xn' ±[标准误]时，说明外周血游离DNA中P53基因待测区域片段xn不存在表观遗传学修饰；否则说明外周血游离DNA中P53基因待测区域片段xn存在表观遗传学修饰；

对P53基因不同待测区域片段的△Ct _xn进行加权计算，具体公式为：

△Ct_加权值= a*△Ct_x1+ b*△Ct_x2+ c*△Ct_x3+d*△Ct _x4；

其中，a,b,c,d为回归分析对P53基因不同待测区域片段对应的△Ct值给出的加权系数；△Ct_x1代表P53基因外显子3区域片段长度为140bp的△Ct值，△Ct_x2代表P53基因外显子3区域片段长度为204bp的△Ct值，△Ct_x3代表P53基因外显子4区域片段长度为153bp的△Ct值，△Ct_x4代表P53基因外显子4区域片段长度为180bp的△Ct值；

根据由△Ct_加权值得到的阈值进行结果判定。