[发明专利]在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒

说明书

本发明公开一种在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒。本发明首先公开了在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组由序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列组成。本发明进一步公开了包含上述引物对组的试剂盒。本发明在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒，该检测具有高敏感性和特异性，对肿瘤风险预测以及疗效评估具有重要的价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地，涉及在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组及试剂盒。

背景技术

在肿瘤预防与治疗的临床需求中，液体活检已成为肿瘤风险预测、靶向药物用药指导以及疗效评估的重要手段，其中肿瘤的早期风险评估是肿瘤预防的最重要的环节。血液因其含有大量肿瘤相关信息无疑是液体检测的最佳样本，其中外周血游离DNA是目前液体活检关注的热点，该游离DNA存在于血浆或血清中，它既可能来自于正常细胞死亡的释放物，也可能来自于肿瘤或癌前病变细胞的死亡释放物，同时无论正常细胞还是肿瘤细胞均可主动释放。

肿瘤的发生发展过程中，不仅涉及基因结构的改变(突变、缺失、转位等)，而且更多的还表现在表观遗传学修饰的变化，尽管关键基因的结构改变在其过程中起着非常重要的作用，但结构性改变发生的位点与频率在很多肿瘤中差异很大，并具有随机性，同时这些改变在疾病的进程中是一个不断积累的过程，特别是在肿瘤的早期，来自于肿瘤结构性改变的DNA在外周血中的丰度都很低，对检测的敏感度要求很高，从而给检测带来了极大的挑战。尽管目前二代测序可以通过增加测序的深度来增加其敏感性，但一方面成本显著的增高，同时另一方面并不是基因所有结构性改变都与肿瘤有关，即有些突变并没有发现其与肿瘤的相关性。

相对于基因突变的低丰度，基因的表观遗传学修饰变化则更为普遍，这样靶向基因修饰差异性的检测则具有更高的敏感性。表观遗传学研究发现，基因的修饰与其表达能力密切相关，这些修饰主要表现在DNA的甲基化和组蛋白的各种修饰上。近来研究发现，表观遗传学修饰既可发生在基因的启动子区域，也可发生在基因体(Gene Body，包含外显子、内含子以及两端的非翻译区)中。已知基因启动子的甲基化与基因表达呈负相关(影响转录因子以及RNA聚合酶的结合)，但对基因体中表观遗传学修饰的功能仍不清楚，当前的研究主要集中在对基因启动子区域的表观遗传学修饰上，而对基因体中各种表观遗传学修饰的变化则关注很少。

由于肿瘤的发生的根本原因是基因组调控异常，P53基因已被证明在肿瘤的发生与发展过程中具有极其重要的作用，特别是在肿瘤的早期阶段，大量报道显示P53基因出现调控异常。因此，建立一种对P53基因表观遗传修饰差异的检测方法，将可实现对肿瘤的风险评估、疗效评价以及预后预测，对肿瘤预防以及治疗均具有重大的指导意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一组用于在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的引物对组。

本发明的另一个目的在于提供一种操作简单、灵敏度高、特异性强的在外周血游离DNA中检测P53基因表观遗传学修饰差异的试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：