[发明专利]临床血液样本分析方法及应用

权利要求书

1.一种免疫细胞蛋白质定量方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供免疫细胞蛋白质的肽段混合物；

(2)以数据依赖性采集模式(DDA)和数据非依赖采集模式(DIA)采集数据，获得DDA数据和DIA数据；

(3)对DDA数据进行数据检索，获得检索结果；

(4)由步骤(3)获得的检索结果构建谱图库；

(5)将步骤(2)获得的DIA数据与步骤(4)获得的谱图库对比，对DIA和谱图库中的谱图匹配程度进行打分，依据样品中掺入的各标肽的保留时间对样品中肽段保留时间进行矫正，优化拟合的模型，完成DIA的数据库检索；和

(6)导出DIA匹配结果，依据阈值筛选出可信肽段的集合，用于肽段和蛋白质定量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞为人外周血CD4+T细胞或CD8+T细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述DDA数据采集中，一级全扫及二级扫描使用高分辨率质量检测器，二级扫描为数据依赖型采集模式。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述DIA数据采集中，一级全扫及二级扫描使用高分辨率质量检测器，二级扫描为数据非依赖型采集模式；任选地，所述DIA数据采集中，一级全扫选择不采集。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，根据DDA样本文件的数据库搜索结果，对DIA方法中母离子分离的循环检测窗口进行动态设置，保证DIA方法中每一个母离子分离窗口内肽段离子数量基本一致。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：优化质荷比的扫描范围以及母离子分离的循环检测窗口总个数，保证DIA数据中肽段平均信号采集点大于等于7和DIA质谱方法的检测窗口循环时间在2秒左右，从而优化并选择合适的DIA方法。

7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤(4)还包括：对DIA数据本身进行数据库检索，独立或整合DDA数据样本文件，构建或完善DIA数据分析所需要的谱图库。

8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，肽段定量为将同一条肽段对其所有子离子强度进行加和，作为该肽段强度，从而获得肽段定量；蛋白质定量为，将蛋白质有定量信息的所有肽段的强度加和，作为蛋白质强度，从而获得蛋白质强度。

9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞来自癌症患者外周血。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述癌症患者为胰腺癌患者。