[发明专利]临床血液样本分析方法及应用

说明书

本发明涉及临床血液样本分析方法及应用。具体而言，本发明提供一种免疫细胞蛋白质定量方法，所述方法包括：提供免疫细胞蛋白质的肽段混合物；以数据依赖性采集模式(DDA)和数据非依赖采集模式(DIA)采集数据，获得DDA数据和DIA数据；对DDA数据进行数据检索，获得检索结果；由获得的检索结果构建谱图库；将DIA数据与谱图库对比，对DIA和谱图库中的谱图匹配程度进行打分，依据样品中掺入的各标肽的保留时间对样品中肽段保留时间进行矫正，优化拟合的模型，完成DIA的数据库检索；和导出DIA匹配结果，依据阈值筛选高可信肽段集合，用于肽段和蛋白质定量。

技术领域

本发明涉及临床血液样本分析方法及应用。

背景技术

胰腺癌是目前世界上发病率第十二、死亡率第七的癌症，胰腺癌的预后极差，每年发病人数和死亡人数接近1:1。世界卫生组织2012年统计结果显示，胰腺癌是目前世界上发病率第十二和死亡率第七的癌症，全世界每年新增胰腺癌病人33万人，每年因胰腺癌死亡的病人有33万人，胰腺癌的发病人数和死亡人数的比值接近1:1。胰腺癌包括内分泌胰腺癌和外分泌胰腺癌，大部分的胰腺癌病人属于外分泌胰腺癌，其中胰腺导管腺癌病人占胰腺癌病人的90％左右。胰腺癌进展非常快，病人预后极差，胰腺癌病人的平均生存期仅为6-9个月，一年生存率为28％，五年存活率为7％；有20％的胰腺癌病人可以进行手术切除，但是可以进行手术切除的病人中有很大一部分会发生癌症复发和转移，这部分患者的中位生存期为12-19个月，五年生存率为20％，胰腺癌有“癌中之王”之称。

尽管从1975到2017年之间美国胰腺癌病人的五年生存率从3.0％上升到 8.5％，但目前胰腺癌患者的5年生存率依然不足10％，不容乐观。早期诊断难、预后差、发生发展快，大部分诊断为胰腺癌的病人都到了晚期。手术切除是目前彻底治愈胰腺癌的唯一有效手段，但是手术切除患者胰腺癌复发比例很高。及早发现、及早治疗对于治愈胰腺癌十分关键，而且手术切除后的患者追踪对于术后及时干预提高患者生存率至关重要。

2011年，Douglas和Robert更是将逃脱免疫监视或者抑制免疫反应列为癌症的十大特征之一。在胰腺癌的发生发展过程中，肿瘤细胞和免疫系统相互博弈。一方面，机体的免疫系统会识别肿瘤细胞表面特异的分子诱发免疫反应，杀死肿瘤细胞，例如CD8+T细胞和NKT细胞；另一方面，肿瘤细胞自身会发生某种突变并借助Treg等免疫细胞，抑制机体的免疫反应，最终逃脱免疫系统的监控，形成明显的肿瘤块和新的转移灶。其中，多个免疫细胞参与这个过程，包括肿瘤相关的巨噬细胞(tumor-associated macrophage，TAM)、髓系来源的抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell，MDSC)、肿瘤相关的中性粒细胞(tumor-associated neutrophils，TMN)、肥大细胞(MC)、树突状细胞(DC)、肿瘤渗透的淋巴细胞(Treg、CD4+T和CD8+T细胞)，这些细胞一起构成肿瘤细胞的免疫调控系统。

相比组织，外周血获取是无创的，样本采集方便容易。而外周血中的免疫细胞作为机体系统免疫中的一部分，一定程度上反应了机体免疫系统的状态。研究胰腺癌病人外周血中不同功能类型免疫细胞在蛋白质水平、肽段水平、蛋白质修饰水平等的定量变化有助于理解、追踪和研究胰腺癌发生发展过程中免疫系统发挥的作用，获得的差异表达蛋白质和或差异表达修饰位点具有广阔的理论指导意义和实际临床应用前景。

发明内容

本发明提供一种免疫细胞蛋白质定量方法，所述方法包括：

(1)提供免疫细胞蛋白质的肽段混合物；

(2)以数据依赖性采集模式(DDA)和数据非依赖采集模式(DIA)采集数据，获得DDA数据和DIA数据；

(3)对DDA数据进行数据检索，获得检索结果；

(4)由步骤(3)获得的检索结果构建谱图库；