[发明专利]一种肿瘤靶向性载体pcTERT及其构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201810543497.X | 申请日： | 2018-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN108715863B | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 马杰;周超;赵通鉴;魏雪晨;周孟瑒;陆元花;宋卓瑶;王孝娟;赵畅 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京金言诚信知识产权代理有限公司 11229 | 代理人： | 张学敏 |
| 地址： | 130000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 靶向 载体 pctert 及其 构建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种构建肿瘤靶向性载体pcTERT的方法，其特征在于，包括下列步骤：
(1)以pcDNA3.1+为模板，设计上游引物：
5’-CTGACGCGTGGAGTTCCGCGTTAC-3’及
下游引物:5’-CGCGCTAGCCAAAACAAACTCCCATTG-3’，经PCR反应，得到pcDNA3.1+质粒中的长度为406bp的cmv增强子片段，并使其5’端带有MluI位点而3’端带有NheI位点；
⑵以人基因组DNA为模板，设计上游引物：
5’-ATAACGCGTACCCTGGGAGCGCGAGCGGC-3’，及
下游引物：5’-CGCGCTAGCCAAAACAAACTCCCATTG-3’，经PCR反应，得到长度为378bp的hTERT启动子片段，并使其5’端带有NheI位点而3’端带有HindIII位点；
(3)将pcDNA3.1+载体及PCR得到的cmv增强子片段分别经MluI及NheI双酶切，T4DNA连接酶进行连接得到中间体1，将中间体1与长度为378bp的hTERT启动子片段分别用NheI及HindIII酶切后，T4DNA连接酶进行连接得到重组载体pcTERT。
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