[发明专利]一种藻蓝蛋白荧光探针及其用于黄曲霉毒素B1快速检测的方法

说明书

本发明提供了一种藻蓝蛋白荧光探针及其用于黄曲霉毒素B1快速检测的方法。将荧光藻蓝蛋白与黄曲霉毒素B1单克隆抗体进行偶联制成荧光探针，并将其应用于试纸条快速检测中，基于竞争免疫层析法原理，建立一种黄曲霉毒素B1快速测定的方法。本发明的快速检测试纸条操作简单快捷，适用于现场大批量样品的快速检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种藻蓝蛋白荧光探针及其用于黄曲霉毒素B1快速检测的方法。

背景技术

藻蓝蛋白是从藻类分离出来的一种天然色素蛋白，不仅可作为天然蓝色色素用于食品、保健品、化妆品等领域，而且，藻蓝蛋白还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和提高免疫等生理功能而广泛应用于医药保健领域。同时，藻蓝蛋白因其强烈的荧光性能可制成荧光试剂探针和荧光示踪剂，用于医疗诊断、免疫学、生物工程和其他研究领域。相对于其他荧光素，藻蓝蛋白具有摩尔消光系数大、荧光量子产率高以及斯托克斯位移大的特点，其脱辅基蛋白链含有氨基和羧基可以与其他分子成键，并同时保持两种分子的生物学活性。

免疫层析技术（immunochromatography）是近20世纪末发展起来的一种分析方法，具有特异性、操作简单、快速等优点，因而成为环境保护、食品安全快速检测分析研究的热点。

根据待检物质和抗体不同的结合模式，可将免疫层析技术分为直接法和竞争法。直接法用于检测多抗原位点的生物大分子，如人类、动物疫病的早期诊断、生化分析、抗体水平监测。竞争法用于抗原结合位点少或仅具有单个抗原结合位点的小分子化合物，多采用标记抗体模式。

竞争法的工作原理为：在毛细管作用力下，待检物质先与结合垫处的标记抗体进行识别而结合，形成抗原-标记抗体复合物继续向前层析，到达T线时，未结合的标记抗体继续与T线的偶联抗原结合形成偶联抗原-标记抗体复合物而显色，当待检样品中的抗原越多，结合的标记抗体越多，则T线上结合到的标记抗体就越少，显色越弱；反之，当待检样品中的抗原越少，结合的标记抗体越少，则T线上结合到的标记抗体就越多，显色越强；抗原-标记抗体复合物或未结合的标记抗体与C线上的二抗结合，C线显色。竞争法常用于检测农药残留、重金属离子、真菌毒素等。

目前，用于免疫层析技术的标记物主要为胶体金，其存在无法定量的缺点。因此，需要一种能够新的定量跟踪的标记物，同时，能保持快速测定、操作简便的优点。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术现状，提供一种藻蓝蛋白荧光探针及其用于黄曲霉毒素B1快速检测的方法。本发明的检测方法操作简单快捷，适用于现场大批量样品的快速检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种藻蓝蛋白荧光探针的制备方法：按摩尔比为10~1:1往pH 为5.0~8.5、浓度为0.01~0.2 M的PBS缓冲液中加入藻蓝蛋白和黄曲霉毒素B1单克隆抗体，振荡混匀，向反应体系中加入体积分数为0.01%~0.5%的交联剂戊二醛，振荡混匀，于10~45℃摇床中匀速振荡，避光反应2~20 h。

一种如上所述的制备方法制得的藻蓝蛋白荧光探针，含1~10 μg/mL黄曲霉毒素B1单克隆抗体。

一种将上述的藻蓝蛋白荧光探针用于黄曲霉毒素B1快速检测的方法，包括以下步骤：

1）用移液枪吸取20~100 μL、0.1-30ng/mL的黄曲霉毒素B1待测样品，再加入10~70 μL含1~10 μg/mL黄曲霉毒素B1单克隆抗体的藻蓝蛋白荧光探针，混匀，竞争反应2~12 min；

2）将步骤1）的反应液滴加至检测卡孔中，层析时间为5~12 min，将检测卡放入荧光免疫层析快速检测设备中进行检测。