[发明专利]一种提高酵母mRNA表达效率的方法在审
| 申请号： | 201810546546.5 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110551750A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 王海勇;杨柳;谭永水;刘新利 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/67;C12N15/31;C12R1/865;C12R1/84 |
| 代理公司： | 12209 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人： | 韩晓梅 |
| 地址： | 250353 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 异源蛋白表达 核糖体蛋白 定向进化 关键因子 合成步骤 酵母表达 酵母宿主 浓度限制 异源表达 游离核糖 重组蛋白 核糖体 酶制剂 突变体 野生型 再利用 异源 酵母 修饰 基因 开发 | ||
【权利要求书】：
1.一种提高酵母mRNA表达效率的方法，其特征在于：所述方法分子定向进化手段，在活体内通过对核糖体翻译基本过程关键基因RLI1进行修饰，加速核糖体再利用，提高细胞内mRNA表达效率。
2.根据权利要求1所述的提高酵母mRNA表达效率的方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)构建RLI1表达盒将GAL1启动子、RLI1基因的开放阅读框及CYC1终止子串联序列(SEQ1)克隆在YCplac111质粒的多克隆位点；
(2)利用易错PCR方法构建RLI1随机突变文库；
(3)将增强型绿色荧光蛋白编码基因克隆在pYD1载体上，构建建立由流式细胞术和酵母细胞表面展示技术为核心的筛选技术；
(4)通过文库筛选，获得可加速核糖体再循环的RLI1突变体；
(5)用此突变体置换酵母染色体基因组上的野生型拷贝，获得基因修饰酵母菌株。
3.根据权利要求2所述的提高酵母mRNA表达效率的方法，其特征在于：RLI1突变体编码的肽链中氨基酸序列与SEQ2同源性至少在70％以上。
4.根据权利1要求所述的提高酵母mRNA表达效率的方法，其特征在于：所述酵母包括酿酒酵母、毕赤酵母，但不限于此两种酵母。
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