[发明专利]一种适用于多种生物样本的DNA提取试剂及其应用

说明书

本发明公开了一种DNA提取试剂及其应用，该DNA提取试剂可以快速提取各种生物样本基因组DNA，且提取效率高。还公开了一种DNA提取方法，包括以下步骤：（1）用加入石英砂的研钵研磨0.1‑1 g生物组织或细胞；（2）加入DNA提取试剂混匀，转入1.5ml离心管，65℃、15 min，12000 rmp、4℃，离心2 min；（3）吸取上清液转至新的1.5ml离心管中，加入等体积KAC混匀，12000 rmp、4℃，离心10 min；（4）吸取上清液至新的离心管，加入RNase A，37℃水浴处理30 min；（5）加入氯仿/异戊醇500µL混匀，12000 rmp、4℃，离心10 min；（6）取水相，转入预冷冻的含600µL异丙醇的离心管中，12000 rmp、4℃，离心10 min；（7）去上清，沉淀凉干，75%乙醇洗涤2次；（8）加TE buffer溶解沉淀。

技术领域

本发明涉及一种DNA提取试剂及其应用，以及一种DNA提取方法。

背景技术

细胞基因组DNA提取是一个基因克隆的基础和关键步骤。获得高纯度DNA是分子生物学研究的基础工作。欲获得高纯度DNA，需要去除细胞内除DNA之外的其他成分，其中主要包括蛋白质、RNA和多糖等成分。同时由于不同生物细胞外的结构不同，例如动物细胞无细胞壁，植物细胞同真菌和细菌的细胞壁不同，因此去除细胞壁，破坏细胞膜，让DNA逸出所采用的方法也不同。寻找到一种快速有效提取和纯化不同细胞基因组DNA的有效和快速的方法，是分子生物学研究的基本任务之一。从原理上说，破碎细胞壁可以用液氮研磨法等，破坏细胞膜可以用离子去垢剂如CTAB和SDS等，防止DNA降解可以用EDTA螯合镁离子，抑制或降低DNase活性，最有效去除RNA的方法是采用RNase A处理样品中RNA，沉淀DNA的有效方法可利用无水酒精和异丙醇沉淀。尽管从原理上看比较简单，但找到一种“万能”的可以快速纯化各种生物样本基因组DNA方法，仍然对分子生物学实验具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种DNA提取试剂，所述DNA提取试剂可以快速提取各种生物样本基因组DNA，且提取效率高。

本发明的另一目的是提供上述DNA提取试剂的应用。

本发明的再一目的是建立一种DNA提取方法。

为达上述目的，本发明采取的具体技术方案是：

一种DNA提取液，由SDS、EDTA、Tris-HCl(pH8.0)、NaCl和β-巯基乙醇组成，其中浓度分别为3％、150mmol/L、50mmol/L、200mmol/L和0.2％V/V，其余为水；

上述所述DNA提取液在生物组织或细胞DNA提取中的应用。

一种DNA提取方法，利用上述所述DNA提取液提取DNA，具体地，包括以下步骤：

(1)用加入石英砂的研钵研磨0.1-1g生物组织或细胞；

(2)加入权利要求1或2所述的DNA提取液混匀，转入1.5mL离心管，65℃、15min，12000rmp、4℃，离心2min；

(3)吸取上清液转至新的1.5mL离心管中，加入等体积KAC混匀，12000rmp、4℃，离心10min；

(4)吸取上清液至新的离心管，加入RNase A，37℃水浴处理30min；

(5)加入氯仿/异戊醇500μL混匀，12000rmp、4℃，离心10min；

(6)取水相，转入预冷冻的含600μL异丙醇的离心管中，12000rmp、4℃，离心10min；

(7)去上清，沉淀凉干，75％乙醇洗涤2次；

(8)加TE buffer溶解沉淀。