[发明专利]一种利用微生物制备环孢菌素的方法

说明书

本发明涉及一种利用微生物制备环孢菌素的方法，属于微生物次级代谢产物应用领域。主要技术方案如下：活化地生弯颈霉菌C41‑3：将地生弯颈霉菌C41‑3接种在灭菌的PDA培养基上，置于25℃的常温培养箱，培养7天；制备种子液：将活化后的地生弯颈霉菌C41‑3置于原液体培养基中，在28℃、120r/min培养5d得到种子液；制备发酵液：将种子液按8vt％的接种量接种于察氏液体培养基中，在24℃、120r/min条件下摇床培养5d得到发酵液；环孢菌素的制备。本发明提供一种利用微生物制备环孢菌素的方法，缓解了环孢菌素A供不应求的问题。

技术领域

本发明属于微生物次级代谢产物应用领域，更具体地说是一种利用微生物制备环孢菌素的方法。

背景技术

免疫抑制剂环孢菌素A(CyclosporineA，CsA)是由11个氨基酸组成的环肽。其分子量为1202，其中含有一个由9个碳组成含乙烯双键的氨基酸。由NMR(核磁共振测定)及MS(质量光谱测定法)测定结果推断其分子式为C₆₂H₁₁₁N₁₁O₁₂。

环孢菌素A对B细胞和巨噬细胞增殖和功能没有直接的抑制作用，这一点对移植耐受性的形成很有意义。已有的研究表明小分子免疫抑制剂联合使用时，作用位点相同的药物联合使用对疗效具有拮抗作用，且毒性增加，而联合使用作用机制不同的药物，则能够降低毒性和提高疗效。

环孢菌素A的免疫抑制作用使其主要用于器官移植时的抗排斥反应和移植物抗宿主病(GVHD)的治疗。随着对环孢菌素A作用机制的不断认识，以及临床某些疾病的发病机制的不断明确，目前环孢菌素A已不仅应用于抗排斥反应。近年来，该药在治疗免疫系统有关的疾病方面，特别是自身免疫性疾病方面也得到了肯定的评价。

发明内容

为弥补现有技术中环孢菌素A产量不足的问题，本发明提供一种利用微生物制备环孢菌素的方法，具有制备方法简单易行、产量高的特点。

本发明的技术方案如下：一种利用微生物制备环孢菌素的方法，包括如下步骤：

(1)活化地生弯颈霉菌C41-3：将地生弯颈霉菌C41-3接种在灭菌的PDA培养基上，置于25℃的常温培养箱，培养7天；

所述的PDA培养基配方为：马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂10g、水500mL；

(2)制备种子液：将活化后的地生弯颈霉菌C41-3置于原液体培养基中，在28℃、120r/min培养5d得到种子液；

所述原液体培养基配方为：葡萄糖50g，蛋白胨10g，KNO₃ 2g，MgSO₄ 2g，CaCl₂0.1g，(NH₄)₃PO₄·3H₂O 2g，水1000mL，装液量为2/5；本发明所述装液量为培养基占盛装培养基容器的体积比；

(3)制备发酵液：将种子液按8vt％的接种量接种于察氏液体培养基中，在24℃、120r/min条件下摇床培养5d得到发酵液；

所述察氏液体培养基的配方为蔗糖30g，NaNO₃ 3g，K₂HPO₄ 1g，MgSO₄ 0.5g，KCl0.5g，FeSO₄ 0.01g，水1000mL，pH为5.0；所述察氏液体培养基的装液量为2/5；

(4)环孢菌素的制备：