[发明专利]一种三碘甲状腺原氨酸酶结合物的制备方法

说明书

本发明涉及一种三碘甲状腺原氨酸酶结合物的制备方法。该方法采用三碘甲状腺原氨酸衍生物（T3‑NHS）直接与酶进行交联结合而成，不需要额外添加活化剂和偶联剂。所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或所述三碘甲状腺原氨酸衍生物为N‑磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo‑NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质。该方法操作简单，成本低廉，稳定性好。

技术领域

本发明涉及一种应用于化学发光免疫分析技术中的三碘甲状腺原氨酸酶结合物的制备方法。

背景技术

3，5，3′三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）是一种对各种靶器官起作用的重要甲状腺激素，分子量为651，血浆中半衰期为1.5天。大约80%的T3形成于外周组织，由T4在脱碘酶的作用下脱碘转化而来，其余的T3是由于甲状腺球蛋白的水解而被释放进入血液循环。T3的分泌受促甲状腺激素（TSH）和促甲状腺激素释放激素（TRH）的调节，而T3的水平对TSH也存在负反馈调节。

T3是通过与血清中的运载蛋白结合而被转运的，主要有甲状腺素结合球蛋白（TBG），前白蛋白和白蛋白，只有约0.4%的T3是游离的，但游离T3（FT3）才真正具备激素的生物活性。体内TT3的浓度受甲状腺激素结合蛋白的浓度的影响，而FT3不受影响，TT3和FT3保持动态平衡，维持正常的甲状腺功能。

FT3可以通过细胞膜与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的的真正活性部分，而且体内FT3的浓度不受甲状腺激素结合蛋白的浓度的影响，能较确切地反映甲状腺的功能状态及其他对人体机能的影响。FT3含量对鉴别诊断甲状腺功能是否正常，亢进或低下有重要意义，对甲亢的诊断很敏感，是诊断T3型甲亢的特异性指标。临床上，TSH，FT3和FT4三项联检，常用以确认甲亢或甲低，以及追踪疗效。

TT3对保持正常的甲状腺功能有着重要的作用，它具有比TT4更高的生物活性，所以TT3的定量检测对早期的甲状腺疾病诊断非常有价值。患有甲亢，高TBG血症，甲亢治疗中等病人TT3水平明显增高；相应的甲减，低TT3综合症，低TBG血症等TT3水平偏低。

用于体内游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）和总三碘甲状腺原氨酸（TT3）测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记三碘甲状腺原氨酸半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵，试剂盒中酶标记物合成工艺是国外厂家高度保密的专利技术。

国内厂家酶联免疫吸附分析法（ELISA）试剂盒以及化学发光免疫分析法（CLIA）试剂盒主要采用的三碘甲状腺原氨酸半抗原酶结合物作为标记物，其中三碘甲状腺原氨酸半抗原为三碘甲状腺原氨酸衍生物（T3-CMO）与牛血清白蛋白（BSA）的结合物（T3-CMO-BSA）或鸡卵清白蛋白（OVA）的结合物（T3-CMO-OVA），此种酶结合物生产工艺复杂，成本较高，容易产生空间位阻影响三碘甲状腺原氨酸特异性抗体的结合。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明公开了一种操作简单、成本低廉、稳定性好的三碘甲状腺原氨酸酶结合物，该酶结合物是化学发光免疫分析法检测游离三碘甲状腺原氨酸试剂盒和总三碘甲状腺原氨酸试剂盒的关键组分。

本发明涉及的三碘甲状腺原氨酸酶结合物是由三碘甲状腺原氨酸衍生物（T3-NHS）与酶发生偶联反应生成，该反应不需要额外添加活化剂和偶联剂。

本发明涉及的三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式为：