[发明专利]ALK基因融合检测引物、方法及试剂盒

说明书

本发明公开了ALK基因融合检测引物、方法及试剂盒，该试剂盒含有SEQ ID NO:1～22所示的引物组和探针。本发明可检测多达15种ALK基因融合类型。引物和探针经过优化和筛选，灵敏度可达100copies/μl，且特异性高。内标用于体系逆转录和扩增监控，保证检测正常进行。另外，试剂盒还包含阴性和阳性对照。多重质控避免检测结果出现假阳性和假阴性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及ALK基因融合检测引物、方法及试剂盒。

背景技术

肺癌是当今世界上对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居恶性肿瘤第一位，其中约80％～85％肺癌患者是非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)。在我国,肺癌也是第一大肿瘤,占全部恶性肿瘤死亡的25.0％。且发病率和死亡率仍在陆续上升,据统计,每年新增肺癌病例达50万～60万。世界卫生组织(WHO)预测,到2025年,中国每年新增肺癌病例将超过100万,成为世界第一肺癌大国。多年来我国肺癌患者的5年生存率无明显提高。然而，近年美国FDA和中国CFDA批准的用于NSCLC靶向治疗的表皮生长因子受体络氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI，如吉非替尼、埃克替尼和奥西替尼等)、ALK激酶抑制剂和ROS1激酶抑制剂(如克唑替尼、艾乐替尼等)能显著改善患者的生存。中国晚期原发性肺癌诊治专家共识、美国国立综合癌症网络(NCCN)临床实践指南以及欧洲肿瘤内科学会(ESMO)肺癌共识均明确建议：晚期NSCLC患者在接受治疗之前应先检测EGFR、ALK和ROS1基因，根据基因状态决定相应的治疗策略。

目前ALK基因融合常用的检测技术有荧光原位杂交FISH、免疫组织化学immunohistochemistry(IHC)和实时逆转录荧光PCR(RT-qPCR)。

荧光原位杂交FISH特异性高，但是样本处理周期长，成本高(探针价格昂贵)，检测结果判读主观性和专业性强。IHC也存在样本处理周期长，且结果受融合蛋白表达量和抗体的特异性和敏感性的影响大，结果判断不确定性大。RT-qPCR具有所需样本少，操作简单，耗时短，成本低，结果判断简单等优点，在临床检测中具有重要作用。但目前市面上的ALK基因融合检测试剂盒灵敏度低，可检测的融合类型少。

发明内容

本发明的目的在于提供ALK基因融合检测引物。

本发明的另一目的在于提供ALK基因融合检测方法。

本发明的再一目的在于提供ALK基因融合检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

ALK基因融合检测引物组，引物组的核苷酸序列为：

F1：AAACTACTGTAGAGCCCAC(SEQ ID NO:1)；

F2：CTAACTCGGGAGACTATGAAA(SEQ ID NO:2)；

F3：CAGACAAGCATAAAGATGTCAT(SEQ ID NO:3)；

F4：AAAATCAGTCTCAAGTAAAG(SEQ ID NO:4)；

F5：CCAGCAAAAATGTCAACTCGCG(SEQ ID NO:5)；

F6：CTGAATCCTGAAAGAGAAATAG(SEQ ID NO:6)；

F7：GCTCTCTGTGATGCGCTACTCAAT(SEQ ID NO:7)；

F8：AATTTACACATTTCAATTCATTCG(SEQ ID NO:8)；

F9：ATGATGGCTTCCAAATAGAAG(SEQ ID NO:9)；