[发明专利]桑脉带相关病毒检测引物和质粒及检测方法在审
| 申请号： | 201810552526.9 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108559791A | 公开（公告）日： | 2018-09-21 |
| 发明（设计）人： | 刘吉平;孙勋勋;周轶楠 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12N15/63;C12R1/94 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 单香杰 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脉带 质粒 检测 引物 核苷酸序列 病毒检测 检测引物 扩增引物 病原菌 病毒 阳性对照质粒 检测结果 片段构建 特异性强 灵敏度 构建 扩增 | ||
1. 一种桑脉带相关病毒特异性检测引物，其特征在于，包括引物对S2776F和S3225R，其核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO:1～2所示。
2.权利要求1所述桑脉带相关病毒特异性检测引物在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。
3.一种桑脉带相关病毒特异性检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述桑脉带相关病毒特异性检测引物。
4. SEQ ID NO:3所示桑脉带相关病毒核壳体蛋白基因序列的1S片段在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述桑脉带相关病毒分子检测产品包括阳性对照质粒或扩增引物。
6. 一种阳性对照质粒1S-pEASY-Bblunt，其特征在于，包含权利要求4所述的1S片段；所述阳性对照质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
7.权利要求6所述阳性对照质粒1S-pEASY-Bblunt在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。
8.一种桑脉带相关病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.提取待测样品的DNA；
S2.以步骤S1提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的检测引物，进行PCR扩增反应；
S3.步骤S2反应结束后，凝胶电泳检测扩增产物，以权利要求6所述阳性对照质粒作为对照，若琼脂糖凝胶上出现特异性的450bp大小左右的DNA片段产物，则判断样品中存在有桑脉带相关病毒；反之，则无。
9. 根据权利要求8所述检测方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应的反应体系为：10μL 2×反应缓冲液，0.5μL 10μM上游引物S2776F，0.5μL 10μM下游引物S3225R，2μL模板DNA，ddH2O补足至20μL；其中，2×反应缓冲液的组分为Taq DNA聚合酶，160mM Tris-HCl，40mM (NH4)2SO4，3.0mM MgCl2，400μM dNTP。
10. 根据权利要求8所述检测方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应的程序为：94℃ 5min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，35个循环；72℃ 10min。
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